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重组型甜菜夜蛾核多角体病毒SeXD1田间传播扩散与室内混合感染研究摘要甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)是对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)专性的杆状病毒.为克服野生型病毒杀虫速度慢的缺点,现已构建出多株高效重组型SeMNPV.SeXD1是SeMNPV基因组中的p10基因被绿色荧光蛋白基因(gfp)所取代,并缺失了chiA、v-cath、gp37、ptp2、egt以及一些功能未确定的开放阅读框ORF.生测结果表明,SeXD1比野生型SeMNPV的ST<,50>提高25％,是一种有开发潜力的重组型病毒.因此,研究其在田间的传播扩散规律,以及与全基因组型病毒的混合感染,探索其传代过程中基因型的变化,对于制定病毒基因工程改造策略,科学应用重组病毒杀虫剂,开发更有益的重组病毒具有重要意义.该研究用低浓度(1×10<4>PIBs/ml)的SeXD1病毒感染3龄甜菜夜蛾幼虫,释放到田间,根据SeXD1的标记性基因gfp,用PCR方法检测甜菜夜蛾蛹和3种非目标害虫(黄曲条跳甲、马陆、稻针缘蝽),结果显示非目标害虫中携带有SeXD1,而蛹中未检测到SeXD1.初步推论,重组型甜菜夜蛾核多角体病毒SeXD1不易在田间垂直传播,非目标害虫可能在SeXD1的传播扩散中发挥重要作用.通过测定滴度TCID<,50>(50%tissure culture infection dose)研究SeXD1和全基因组型甜菜夜蛾核多角体病毒SeC(SeMNPV complete,SeC)在虫体和细胞内的复制速度,发现这两种病毒在虫体和细胞内的复制速度有显著性差异,在细胞内SeXD1的复制起始速率较SeC快.用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR)方法研究了上述SeXD1和SeC在虫体和细胞内的混合感染,结果表明:在虫体内,gfp基因所代表的重组型病毒基因型的量逐代下降,到第10代几乎完全消失,重组基因型与Se15所代表的基因型比例也逐渐降低;在细胞内的总体趋势是,SeXD1逐渐取代了SeC,成为细胞内主要的基因型.