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目的观察NGFβ/HIF-1α双重基因转染的BMSCs对神经元轴突再生微环境的改善作用,为脊髓损伤的治疗探索新方法、提供新的观点和手段,对于完善微环境中轴突再生的影响因素理论提供可靠的资料。方法首先,分别构建携带编码NGFβ、HIF-1α的慢病毒载体并测定慢病毒载体的最佳感染复数。其次,用所测得MOI转染BMSCs后,用western blot方法检测转染后的BMSCs表达NGFβ、HIF-1α的情况。再次,培养SD大鼠皮质神经元与转染后的BMSCs用transwell双层培养板构建共培养体系。将共培养体系在厌氧培养罐中培养48小时后,用ELISA方法检测神经元培养上清液中NGFβ、HIF-1α、VEGF的表达水平,并用Image pro-Plus软件测量神经元轴突的长度。实验分组:A组,单独培养神经元;B组,BMSCs与神经元共培养;C组,NGFβ转染的BMSCs与神经元共培养;D组,HIF-1α转染的BMSCs与神经元共培养;E组,NGFβ/HIF-1α双重转染的BMSCs与神经元共培养。结果1、成功培养BMSCs并用流式细胞仪检测表面标记物显示CD29阳性、CD44阳性、CD45阴性、CD90阳性,符合公认的BMSCs免疫表型。2、Le-RFP-NGFβ和Le-GFP-HIF-1α基因转染BMSCs转染率分别为84.83%和89.63%。Western blot检测显示转染后的BMSCs能表达目的蛋白NGFβ和HIF-1α。3、共培养体系ELISA检测结果显示C组和E组的NGFβ的表达量明显高于A、B组(P<0.05);D组和E组的HIF-1α的表达量明显高于A、B组(P<0.05)。D、E两组的VEGF表达量高于A、B两组(P<0.05)。Image pro-Plus测量神经元轴突长度结果显示,C、D、E组大于A、B两组(P<0.05),E组大于C、D组(P<0.05)。结论1、双重基因转染的BMSCs成功高表达NGFβ和HIF-1α。2、与NGFβ/HIF-1α双重转染BMSC共培养的神经元轴突生长情况良好,在共培养环境中对神经元存活发挥重要作用的NGFβ、HIF-1α、VEGF等因子高表达。