NGFβ/HIF-1α双重基因转染的骨髓间充质干细胞对神经元轴突再生微环境的改善作用

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目的观察NGFβ/HIF-1α双重基因转染的BMSCs对神经元轴突再生微环境的改善作用,为脊髓损伤的治疗探索新方法、提供新的观点和手段,对于完善微环境中轴突再生的影响因素理论提供可靠的资料。方法首先,分别构建携带编码NGFβ、HIF-1α的慢病毒载体并测定慢病毒载体的最佳感染复数。其次,用所测得MOI转染BMSCs后,用western blot方法检测转染后的BMSCs表达NGFβ、HIF-1α的情况。再次,培养SD大鼠皮质神经元与转染后的BMSCs用transwell双层培养板构建共培养体系。将共培养体系在厌氧培养罐中培养48小时后,用ELISA方法检测神经元培养上清液中NGFβ、HIF-1α、VEGF的表达水平,并用Image pro-Plus软件测量神经元轴突的长度。实验分组:A组,单独培养神经元;B组,BMSCs与神经元共培养;C组,NGFβ转染的BMSCs与神经元共培养;D组,HIF-1α转染的BMSCs与神经元共培养;E组,NGFβ/HIF-1α双重转染的BMSCs与神经元共培养。结果1、成功培养BMSCs并用流式细胞仪检测表面标记物显示CD29阳性、CD44阳性、CD45阴性、CD90阳性,符合公认的BMSCs免疫表型。2、Le-RFP-NGFβ和Le-GFP-HIF-1α基因转染BMSCs转染率分别为84.83%和89.63%。Western blot检测显示转染后的BMSCs能表达目的蛋白NGFβ和HIF-1α。3、共培养体系ELISA检测结果显示C组和E组的NGFβ的表达量明显高于A、B组(P<0.05);D组和E组的HIF-1α的表达量明显高于A、B组(P<0.05)。D、E两组的VEGF表达量高于A、B两组(P<0.05)。Image pro-Plus测量神经元轴突长度结果显示,C、D、E组大于A、B两组(P<0.05),E组大于C、D组(P<0.05)。结论1、双重基因转染的BMSCs成功高表达NGFβ和HIF-1α。2、与NGFβ/HIF-1α双重转染BMSC共培养的神经元轴突生长情况良好,在共培养环境中对神经元存活发挥重要作用的NGFβ、HIF-1α、VEGF等因子高表达。
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