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研究背景和目的深II度烧伤创面坏死组织是影响创面愈合的重要因素,由于其坏死组织的持续存在,会加重创面局部炎症反应,导致感染和局部组织进行性损害。及早清除坏死组织是促进深II度烧伤创面愈合的重要治疗手段之一。目前最常用及有效的去除深II度烧伤创面坏死组织的方法为中药脱痂和手术削痂(tangential excision)。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulatingfactor,GM-CSF)可由多种创面组织细胞合成和分泌,趋化和激活炎症细胞(中性粒细胞和巨噬细胞),从而调控创面愈合的进程。既往研究表明,深II度烧伤创面的溶痂主要是创面炎症细胞所分泌的蛋白水解酶和基质金属蛋白酶的作用,故我们设想GM-CSF具有通过趋化、激活炎症细胞促进深II度烧伤创面脱痂并加快创面愈合的作用。本研究通过动物实验和临床观察,验证重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,rhGM-CSF)对深II度烧伤创面坏死组织溶痂和促进创面愈合的作用效果,并分析其可能的机理。研究方法1.动物实验SD大鼠70只用热液烧伤的方法(75°C、8s)制成背部深II度烧伤创面,烧伤大鼠随机分为实验组和对照组(每组35只)。对照组(C组):创面局部外用不含rhGM-CSF的凝胶基质,实验组(E组):创面局部外用rhGM-CSF凝胶(100μg/10g)。烧伤后每天外用药物至伤后21d。分别于制创后1、3、5、7、10、14和21d观察两组动物创面情况并摄像,记录创面平均溶痂时间;用图像分析软件计算不同时相点的溶痂率;并于不同的时相点取创面组织,HE染色观察创面组织形态及修复情况;免疫组化染色观察创面中性粒细胞和巨噬细胞浸润情况。ELISA法测定创面弹力蛋白酶(NE)和基质金属蛋白酶(MMP-1、MMP-9)的蛋白表达。并作统计学分析。2.临床观察收集我院自2008年12月份至2010年12月份烧伤部位对称或临近、烧伤深度为深II度的小面积烧伤患者共58例,随机分为实验组和对照组。实验组创面使用100ug/10g/支rhGM-CSF凝胶剂,对照组使用不含rhGM-CSF的凝胶基质,隔天换药。观察并计算深II度烧伤创面自换药后完全溶痂时间,第2、6、10、14、18天创面溶痂率,烧伤后创面愈合时间。研究结果1.动物实验:1.1、从烧伤后第5d起各时相点,实验组大鼠创面溶痂率与对照组表现出差异;实验组创面平均溶痂时间为10.73±2.47d较对照组14.26±2.65d显著缩短(P<0.01);实验组和对照组创面愈合时间分别为16.21±1.27d和18.05±1.36d,差异显著(P<0.01);1.2、创面病理检查提示伤后3-7d,实验组创面局部炎症细胞浸润较对照组增多,实验组创面局部坏死组织脱落也较对照组提前;1.3、两组动物创面均于伤后3d起NE显著增高,伤后7d达到峰值。之后逐渐下降,至伤后14d基本接近伤前水平。实验组于伤后3-7d,NE水平明显高于对照组(P<0.01)。而两组创面MMP-1和MMP-9的蛋白水平则于伤后3d到达峰值,继之逐渐下降,至伤后14d均接近伤前水平;其中实验组在伤后3-5d,MMP-1和MMP-9的水平均显著高于对照组水平(P<0.01);2.临床观察试验组完全溶痂时间为7.71±2.76d,较对照组14.13±3.34d明显缩短(P<0.01);实验组第2、6、10天创面溶痂率(%)分别为34.30±10.40、82.20±17.50、98.36±4.46,较对照组11.03±4.47、40.69±11.56、68.88±9.76明显提高(P<0.01);实验组深II度烧伤创面平均愈合时间18.41±2.47d较对照组平均愈合时间23.58±3.35d明显缩短(P<0.01);研究结论动物实验和临床观察表明,外源性rhGM-CSF的应用可促进深II度烧伤创面早期炎症细胞的浸润,提高创面局部NE、MMP-1、MMP-9的蛋白表达,促进创面溶痂,从而促进深II度烧伤创面愈合。