PPARγ在鹅卵巢颗粒细胞脂质代谢中的功能研究

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鹅产蛋时所处的饲养环境和方式,会在一定程度上影响鹅的产蛋性。同时,卵泡的发育与激素的水平,也能调控鹅的产蛋性。而鹅产蛋的数量被决定的最直接的因素,必然是卵泡的发育。颗粒细胞不断的增殖继而凋亡,卵泡类的固醇激素,其中含量的变化,均伴随着卵泡的发育。脂质代谢的调控因素如下,它由脂肪酸的从头合成,脂肪酸β氧化与甘油三酯进行合成和分解一起构成,其中PPARγ在脂质代谢中发挥重要的作用,在脂肪细胞中高水平表达,具有极强的生脂作用,是调控脂质沉积的重要因子。本试验通过基因克隆获得PPARγ基因CDS区序列和启动子序列,并应用实时荧光定量技术检测不同发育阶段卵泡膜层和颗粒层中PPARγ的表达量,同时在体外培养的鹅颗粒细胞中分别转染PPARγ的过表达载体、PPARγ干扰载体,检测脂质代谢、胆固醇合成等相关途径的关键基因表达量变化,以探究PPARγ在鹅卵巢颗粒细胞脂质代谢中的功能。以下是它得到的大体研究成果。(1)克隆获得鹅PPARγ基因CDS区序列1428bp,启动子序列2795bp。鹅PPARγ基因与其他鸟类相似性为第一高,都处于98%以上,符合物种遗传进化规律;PPARγ启动子具有4个核心启动子区,具有多个转录因子结合位点。(2)在鹅等级前卵泡中,PPARγ在膜层中的表达量高于同时期颗粒层;在鹅等级卵泡中,F5阶段卵泡颗粒层PPARγ表达量最高;除F1阶段卵泡中膜层PPARγ表达量高于颗粒层外,F5~F2阶段卵泡中颗粒层中PPARγ的表达量均高于同时期膜层。(3)干扰PPARγ基因表达后,颗粒细胞中FAS基因表达量上升但不显著(P>0.05),ACC基因的表达量显著上升(P<0.05);ApoB与CPT-1基因表达量降低但不显著(P>0.05),SREBP1、DGAT-1、DGAT-2基因的表达量显著上升(P<0.05);CCND2基因表达量显著降低(P<0.05),STAR、SREBP2基因的表达量上升但不显著(P>0.05)。(4)过表达PPARγ基因后,颗粒细胞中ApoB基因表达量上升但不显著(P>0.05),CPT-1基因表达量显著上升(P<0.05),FAS基因表达量下降但不显著(P>0.05),发生显著下降的是ACC基因,其表达量(P<0.05),DGAT2基因表达量极显著下降(P<0.01),SREBP2基因表达量下降但不显著(P>0.05),CCND2基因的表达量显著上升(P<0.05),STAR基因的表达量显著下降(P<0.01),BCL2基因表达量显著下降(P<0.01)。
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