甘蓝型油菜C6染色体上反向重复区段中倒位事件的解析

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:CNHTC01
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染色体倒位是指正常的染色体某一区段的DNA序列发生180°颠转的一种染色体结构变异,普遍存在于真核生物中。虽然染色体倒位会抑制连锁基因间的重组,但其在物种形成、适应和进化中都扮演了重要角色。甘蓝型油菜是重要的油料作物之一,与拟南芥同属于芸薹科,是包含A、C基因组的异源四倍体,基因组结构非常复杂。目前,分析芸薹属染色体结构变异主要基于遗传图谱的比较,缺乏对特殊事件的验证以及深入解析。  本研究以TapidorDH(欧洲冬油菜)与Ningyou7DH(中国半冬性油菜)为亲本所构建的包含202个株系的TNDH群体,以Ningyou7DH为轮回亲本、TapidorDH为供体亲本所构建的高世代回交导入系为材料,对甘蓝型油菜C6染色体倒位事件进行了分析,探索了该染色体倒位事件产生的可能机制,为其在油菜遗传育种过程带来的影响提供初步理论基础。主要结果如下:  1.利用温室的BC4F2群体对前期研究发现C6染色体上的倒位事件进一步确认,并借助TNDH连锁图谱着丝粒标记信息,判定该倒位属于臂内倒位。随后对筛选回交得到的BC5F2群体再次遗传作图,发现该倒位还是存在,说明倒位发生后可以进行稳定遗传。  2.由于臂内倒位杂合体的花粉母细胞在减数分裂后期Ⅰ可能出现双着丝粒染色体桥和无着丝粒断片,因此观察并统计了倒位杂合体BC4F1导入系中染色体桥出现的频率,并以亲本TapidorDH和Ningyou7DH及其杂交后代F1作为对照。发现BC4F1导入系染色体桥频率最高,与亲本以及F1对照出现染色体桥频率达到了极显著差异。  3.利用C基因组探针,结合甘蓝型油菜C6染色体特异探针,以Ningyou7DH的Cot-1DNA作为封阻,对倒位杂合体BC4F1导入系后期I进行原位杂交,并以亲本TapidorDH和Ningyou7DH后期I作为对照,发现亲本后期I时C基因组信号均匀分布细胞两极,而倒位杂合体后期I染色体桥上显示C6染色体特异探针信号,由此说明倒位事件真实存在C6染色体上,进一步验证了比较图谱的结果。  4.倒位杂合体在减数分裂形成配子时有部分是缺失或重复的,从而导致育性降低,表现部分不育。分别随机观察倒位杂合体BC4F1和BC5F1导入系500个左右的花粉粒,并以亲本TapidorDH,Ningyou7DH以及F1为对照统计花粉不育频率。结果表明,倒位杂合体BC4F1和BC5F1导入系的花粉不育频率显著高于对照的花粉不育频率。  5.选取倒位区段外和倒位区段内的两个AP1的同源基因,在倒位杂合体,倒位纯合体以及TapidorDH和Ningyou7DH中进行半定量RT-PCR分析,发现不同材料中两个AP1基因在花蕾和花中都在表达,由此说明倒位没有影响区段内AP1基因的功能。
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