花生植株中白藜芦醇的提取纯化工艺

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白藜芦醇具有抗真菌、细菌、病毒、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗氧化以及保护心血管系统等多种药理作用。而目前主要以有限的中药资源虎帐为提取原料,因此开发一种新资源来提取白藜芦醇在环境保护和经济价值方面都具有重要的意义。本文以收割后废弃花生根茎叶为原料,在单因素实验基础上采用响应面法优化乙醇回流提取花生根茎叶中的白藜芦醇,并用柱层析法对白藜芦醇粗品纯化,重结晶后得到高纯度白藜芦醇,探索出一项利于环保的绿色提取分离纯化白藜芦醇的技术。(1)以高效液相色谱法为检测白藜芦醇的有效方法,确定了HPLC检测白藜芦醇含量的色谱条件:Kromasil色谱柱(5um,4.6mm×250mm),流动相组成:乙腈:水=30:70,流速为1.0mL/min,进样量20μL:柱温25℃。(2)确定了以一种新原料-废弃花生植株,并采用回流法提取白藜芦醇。在单因素试验基础上,以白黎芦醇的提取率和纯度为评价指标,应用Box-Behnken中心组合进行3因素3水平的实验设计,得到在同一提取条件下白藜芦醇提取率与纯度最佳提取工艺条件为:乙醇体积分数76.27%,提取时间3.22h,料液比1:11.01(g∶mL),提取次数3次。白藜芦醇提取率与纯度分别为87.07%和0.069%,其合意性为0.900。(3)通过对分离条件的研究,得到分离白藜芦醇工艺的优化条件:加入6倍体积蒸馏水,乙酸乙酯:水为1∶1(v/v),萃取3次,回收乙酸乙酯得浸膏,石油醚:浸膏为6∶1(v/w),结果白藜芦醇提取率和纯度分别86.41%2.13%。(4)采用硅胶柱层析法对粗品白藜芦醇纯化,优化后工艺条件为:干法上样,样品:硅胶1∶50,选用丙酮:正己烷(3∶7)作为柱层析洗脱剂,洗脱后得到白藜芦醇的纯度为71.35%,收率为93.4996。用二氯甲烷:乙酸乙酯5∶1(v/v)和三氯甲烷:乙酸乙酯5∶1(v/v)分别对白藜芦醇进行结晶和重结晶得到白藜芦醇的白色结晶体,其纯度达到98.01%,收率为90.59%。纯化所得白藜芦醇经高效液相色谱鉴定与标准品出峰情形大致相同,白藜芦醇的绝对含量为98.23%。(5)开发出一条以废弃花生根茎叶为原料,应用环境友好绿色技术提取白藜芦醇的新工艺,把此农业废弃物转化为具有高经济价值和实用价值的产品。
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