论文部分内容阅读
深入开展IBS内脏感觉过敏神经机制的研究,必须以比较成熟的IBS动物模型为基础.在人体,早期生活事件可增加成年后IBS发生的危险性;与此类似,新生期母婴分离对大鼠而言是一种早期生活事件,可致幼鼠中枢神经系统的永久改变,Coutinho等发现,新生期母婴分离大鼠模型具有内脏痛觉过敏和应激后结肠运动加强等表现,能较好模拟IBS患者的主要特征.因此,该研究采用新生期母婴分离方法建立大鼠模型,检验此模型的内脏高敏感性,并检测P物质和5-HT系统在脑-肠轴上的表达,探索IBS内脏感觉过敏的神经机制.目的:(1)研究新生期母婴分离对大鼠结直肠球囊扩张时感觉反应的影响;(2)研究P物质和5-HT系统在新生期母婴分离大鼠模型脑-肠轴上的表达.方法:(1)新生期Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为两组:(a)母婴分离组:在出生后第2天至2l天,每天将新生大鼠与哺乳期母鼠分离3小时;(b)对照组:在出生后第2天至2l天,不给予任何处理.成年后(出生后60天)给予结直肠球囊扩张(colorectal distension,CRD),用行为学观察和腹部回缩反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)评分来评估内脏痛反应,用免疫组化方法检测腰骶段脊髓背角c-fos蛋白的表达量,并进行远端结肠常规组织学检测;(2)取远端结肠和腰骶段脊髓进行P物质和NKl受体免疫组化检测并定量分析;(3)用免疫组化和Real-time PCR方法检测远端结肠中5-HT、5-HT3受体和5-HT转运蛋白的表达和分布,用ELISA方法检测远端结肠和腰骶段脊髓中5-HT的含量,用免疫组化双标方法检测脑干中缝背核中5-HT能神经元的活化数量.结论:(1)新生期母婴分离使成年后大鼠在内脏刺激时产生过强的内脏痛反应和神经元活化反应,且不伴有结肠组织学改变,符合IBS内脏感觉过敏的特点.(2)新生期母婴分离对P物质和NKl受体表达的影响不明显,P物质和NKl受体在母婴分离大鼠模型内脏感觉过敏发生机制中的作用可能不大.(3)新生期母婴分离引起大鼠5-HT系统在中枢和外周的长期改变,导致在内脏刺激下中枢和外周5-HT系统的异常反应,提示早期生活事件所致5-HT系统的异常可能在IBS内脏感觉过敏的发生机制中起重要作用.