【研究背景】银屑病是一种常见的多基因遗传、多环境因素诱导的慢性炎症性增殖性皮肤病。目前认为银屑病不仅仅只是一种皮肤疾病,因为银屑病患者往往伴有糖尿病、高血压、冠心病、肥胖、抑郁和代谢综合征等系统性疾病,所以,银屑病现已成为严重影响广大人民群众身心健康的复杂性疾病之一众所周知,外用糖皮质激素制剂在治疗银屑病中应用最广泛,是银屑病治疗的一线药物,其对银屑病皮损的清除十分迅速有效。糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)的作用如此强大,主要是通过其受体——糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor, GR)来实现的。GR属于核受体家族,广泛分布于几乎所有细胞上。大量研究表明GR能够在细胞核和细胞浆之间穿梭。在没有激素的情况下,GR主要存在于细胞胞浆中,与分子伴侣和其他蛋白组成多蛋白复合物。GC与GR结合后诱导多蛋白复合物发生构象变化,促使GR从复合物中解离,并转位至细胞核中。根据细胞类型的不同,未转化的GR可以位于胞浆或胞核中。一旦与配体结合,未转化的GR即通过核转录因子转位进入细胞核,细胞核中GR与特异性DNA序列糖皮质激素反应元件结合,调节靶基因的转录。我们的初步研究表明,正常人角质形成细胞中GR位于细胞核中,而银屑病角质形成细胞中GR则位于细胞浆中,即银屑病角质形成细胞中GR发生核质转运障碍。哪些因素导致了GR核质转运障碍的发生?GR核质转运障碍的机制和意义是什么?这些问题促使我们通过体外细胞培养和建立银屑病小鼠模型对银屑病皮损角质形成细胞中GR的表达和功能进行深入的综合分析,探讨GR在银屑病发生发展过程中的变化及其在表皮角质形成细胞增殖过程中的作用。[目的]明确在银屑病角质形成细胞中,存在糖皮质激素受体的核质转运障碍；阐明银屑病角质形成细胞糖皮质激素受体核质转运障碍的原因以及可能的信号传导通路的作用；明确导致银屑病角质形成细胞糖皮质激素受体核质转运障碍的机制,发现新的与糖皮质激素受体核质转运有关的分子及其作用；阐明银屑病角质形成细胞核质转运障碍的意义,从而通过促进糖皮质激素受体的核转位,发现治疗银屑病的新方法。[方法]第一部分：间接免疫荧光法检测糖皮质激素受体在正常表皮和银屑病皮损的表达和定位；分离和培养正常人和银屑病患者表皮角质形成细胞,以间接免疫荧光法检测糖皮质激素受体在细胞中的定位；以Western Blot法比较糖皮质激素受体在正常人和银屑病患者表皮角质形成细胞中表达；ELISA(?)去检测银屑病患者外周血中促肾上腺皮质激素和皮质醇的水平；将细胞因子(如VEGF165和IFN-γ等)与体外培养的角质形成细胞共孵育,间接免疫荧光法检测对糖皮质激素受体的核质分布影响。第二部分：分离和培养正常人和银屑病患者表皮角质形成细胞,与GSK-3、p53和微管蛋白抑制剂共培养,间接免疫荧光法检测上述因素对糖皮质激素受体核转位的影响；以外源性细胞因子刺激培养的正常人和银屑病角质形成细胞,间接免疫荧光法检测对糖皮质激素受体的影响。第三部分：外用咪喹莫特诱导Balb/c小鼠产生银屑病样皮损；静脉注射IL-13和微管抑制剂vincristine,观察对咪喹莫特诱导银屑病样皮损的影响；对小鼠标本进行Masson三染,评价IL-13和vincristine对咪喹莫特诱导小鼠的影响。[结果]一、糖皮质激素受体在银屑病表皮和正常表皮的定位和定量表达：1.糖皮质激素受体强烈表达于银屑病表皮和正常表皮除角质层外的各层细胞；2.糖皮质激素受体在银屑病表皮和正常表皮细胞内的分布是不同的：糖皮质激素受体位于银屑病表皮细胞的胞浆中,而在正常表皮细胞中却位于胞核内；3.体外培养的银屑病和正常角质形成细胞内糖皮质激素受体的分布与组织免疫荧光结果一致：糖皮质激素受体位于银屑病角质形成细胞的胞浆中,而位于正常角质形成细胞的胞核内；4.银屑病与正常角质形成细胞之间糖皮质激素受体的表达量无差异；二、银屑病与正常角质形成细胞糖皮质激素受体核转运影响因素：1.银屑病患者与正常对照之间外周血促肾上腺皮质激素和皮质醇水平无差异;2. VEGF165和IFN-γ可诱导正常角质形成细胞糖皮质激素受体核转运障碍；3.地塞米松可逆转VEGF165和IFN-γ诱导的糖皮质激素受体核转运障碍；4.内皮素-1、肝细胞生长因子、转化生长因子、白介素10、白介素13、白介素17、血小板源性生长因子(?)(?)A/AB/BB对正常角质形成细胞糖皮质激素受体核质转运无影响；5.ATP水平对正常角质形成细胞糖皮质激素受体的核质转运无影响。三、银屑病角质形成细胞糖皮质激素受体核质转运障碍机制：1.p53抑制剂可抑制VEGF165和IFN-y诱导的糖皮质激素受体核质转运障碍；2.微管抑制剂vincristine可抑制糖皮质激素受体的核摄取；3.GSK-3抑制剂不能抑制糖皮质激素受体的核摄取；4.地塞米松促进银屑病表皮角质形成细胞胞浆糖皮质激素受体进入细胞核内；5. IL-13、PDGF-AA、PDGF-AB和PDGF-BB可促进银屑病表皮角质形成细胞糖皮质激素受体进入细胞核内,而ET-1、HGF、TGF-β1、IL-10和IL-17不能促进糖皮质激素受体进入细胞核内；6.突然撤去地塞米松可诱导正常角质形成细胞糖皮质激素受体聚集在胞浆中。四、IL-13和微管抑制剂对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型的影响：1.咪喹莫特诱导的Balb/c小鼠模型具有银屑病的主要特征,包括表皮过度增殖肥厚、炎症细胞浸润和真皮微血管增生；2.IL-13可减轻咪喹莫特诱导小鼠的红斑、鳞屑、表皮厚度和浸润炎症细胞的数目；3.微管抑制剂可加重咪喹莫特诱导小鼠的红斑、鳞屑和微血管数目。【结论】一、银屑病角质形成细胞糖皮质激素受体发生了核质转运障碍；二、银屑病角质形成细胞糖皮质激素受体发生的核质转运障碍与体内促肾上腺皮质激素和皮质醇水平无关；三、VEGF165和IFRN-γ可诱导正常角质形成细胞糖皮质激素受体发生核质转运障碍,而地塞米松可逆转此诱导效应；四、角质形成细胞糖皮质激素受体发生核质转运障碍是非APT依赖的；五、VEGF165和IFN-γ诱导的糖皮质激素受体核质转运障碍需要p53参与；六、微管介导糖皮质激素受体的核摄取,p53介导糖皮质激素受体的核输出,而GSK-3抑制剂不能抑制糖皮质激素受体的核转运；七、地塞米松促进银屑病角质形成细胞糖皮质激素受体核转运需要微管参与；八、IL-13、PDGF-AA、PDGF-AB和PDGF-BB可促进银屑病表皮角质形成细胞糖皮质激素受体进入细胞核内；九、突然撤去地塞米松可诱导正常角质形成细胞糖皮质激素受体聚集于胞浆；十、IL-13可减轻咪喹莫特诱导小鼠的银屑病样损害；十一、微管抑制剂可加重咪喹莫特诱导小鼠的银屑病样损害。