在世界范围内,宫颈癌的发病率位居女性恶性肿瘤第四位,每年有大约53万新发病例,其中死亡例数高达266,000例。在我国,每年新发病例约6.2万,占世界宫颈癌新发病例的30%,是仅次于乳腺癌而引起妇女生殖系癌症相关死亡的重要原因之一。宫颈病变的进展通常需要十到二十年的时间,病变才能从HPV感染最终进展形成宫颈癌。正是由于这一过程需要一个长期且较为缓慢的时间,因此可以认为宫颈癌是一种可以预防的恶性肿瘤。宫颈癌所具有可预防性的这一特点,使其可以在进展为癌变之前,可以通过有效的手段来阻止其发生及进展。及时检测出宫颈病变并做出处理,对降低宫颈癌的发病率及死亡率将起到重要作用。目前,被世界范围内广泛推广应用的宫颈癌筛查手段是“三阶梯”筛查方案,首先采用宫颈细胞学检查、人类乳头瘤病毒DNA检测对人群进行初筛,其次采用阴道镜检查对异常结果患者进行进一步检查,最后行子宫颈活组织病理学检查确诊,通过这一筛查模式的应用,可以筛查出大部分宫颈癌前病变患者,使这部分患者在疾病进展之前得到及时的诊断和治疗,宫颈癌的发病率和死亡率得到了明显控制。但TCT检查存在缺点,如敏感度低,意义不明的非典型鳞状上皮细胞的比例高等,这是由于受到取材和人为因素影响的原因。而HPV检查虽然敏感度高,但特异度低,且大部分女性多为一过性感染,尤其在年轻性生活活跃的女性。并且以上两种方法均不能预测宫颈病变的进展,因此需要探索出一种新的临床指标来预测宫颈癌的发生及发展并协助上述检查方法。现代分子生物学及遗传学表明,在人类大多数恶性肿瘤的发生中,多与染色体的不稳定性有关,许多研究发现3号染色体长臂的扩增几乎存在在所有宫颈细胞由非典型增生向宫颈癌转变的过程中,该基因定位在3q26.3,为人类染色体端粒酶RNA基因。hTERC基因可阻止细胞的凋亡,导致肿瘤的发生。hTERC基因的异常扩增也许是宫颈癌形成过程中的早期事件,是宫颈癌的发病机制之一。探讨hTERC基因在宫颈癌前病变中的表达情况和临床意义也许可以为宫颈癌筛查提供一种新的方式,也可以协助宫颈癌的诊断和预后随访。荧光原位杂交技术是20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一项非放射性分子细胞遗传学技术。其基本原理是采用已知的标记单链核苷酸为探针,按照碱基互补原则,与待测材料中未知的单链核苷酸杂交,形成可被检测的杂交双链核酸(荧光显微镜下可见的荧光信号),从而对待测核酸进行定性、定量及定位分析,可发现常规细胞遗传技术无法检测到的基因或染色体异常。目前FISH技术在细胞遗传学、病原微生物、肿瘤生物学、产前诊断等领域已被广泛应用,尤其是肿瘤诊断,如乳腺癌、膀胱癌、胆管癌、卵巢癌等的检测。美国国立卫生研究院针对宫颈癌的研究显示,认为FISH技术同样可以应用于子宫颈癌的检测,并指出将FISH技术应用于子宫颈癌前病变筛查以及预后的监测方面有重要的临床意义。FISH技术能够客观地从基因学角度检测出各级别宫颈癌前病变中不同程度的hTERC基因扩增。目前,FISH技术可检测宫颈脱落细胞和石蜡包埋切片中hTERC基因的表达,均有较高的敏感度、特异度及阳性预测值。众所周知,诊断为宫颈上皮内瘤变的患者未来发展趋势有三种形式,进一步进展为高级别病变,转归为低级别病变,或持续该级别病变。事实上,许多宫颈上皮内瘤变是可以随着时间的推移而逐渐转归的,在所有影响因素中,转归率主要取决于宫颈上皮内瘤变的级别和患者的年龄,根据宫颈上皮内瘤变级别的不同,CINⅠ约有60%可自行转归,30%病变持续,10%发生进展,CINⅡ约40%自行转归,40%病变持续,20%到30%进展,CINⅢ中则仅有不到30%转归,约有10～50%进展。根据年龄的不同,30岁以下的妇女比30岁以上的妇女更容易转归。总的来说,排除所有干扰因素,可以粗略的认为三分之一早期病变可自然转归,三分之一病变持续存在,三分之一的病变进展为CINⅢ或浸润癌。临床对CINIⅡ/Ⅲ的患者多采取积极治疗,而对CIN Ⅰ的治疗还存在困惑,由于CIN Ⅰ进展比例少,很可能导致过度治疗,但CIN Ⅰ仍有一部分存在进展的可能,对其放任不治疗,又将可能导致疾病的进展。因此,临床上需要探索一种指标来预测CIN Ⅰ的发展。为此,本课题基于中山市“两癌筛查”项目(2011年1月～2013年12月由中山市博爱医院组织并具体实施对适龄妇女约13万人进行宫颈癌、乳腺癌大样本筛查)的数据,采用回顾性研究方法,应用FISH技术对CIN Ⅰ患者的宫颈石蜡包埋病理标本进行hTERC基因检测,探讨hTERC基因在预测CIN Ⅰ的进展及转归中的价值,为临床治疗CIN Ⅰ提供实验数据。研究目的：1.对2012年3月至2013年3月“两癌筛查”项目中的CIN Ⅰ患者的宫颈石蜡包埋病理标本采用FISH技术进行hTERC基因检测。2.通过观察各个实验组hTERC扩增情况,探索hTERC基因在预测CIN Ⅰ进展和转归中的价值。3. 比较各个实验组hTERC基因扩增异常信号比类型,探讨hTERC基因异常信号比与CIN Ⅰ进展和转归的关系。研究方法：1. 收集55例CIN Ⅰ患者的富颈石蜡包埋病理标本,随访后根据病理学确诊分为3组,CIN Ⅱ/Ⅲ及宫颈癌组(进展组)13例、CIN I组(持续组)19例、正常或炎症组(转归组)23例。采用FISH技术检测以上各组宫颈石蜡包埋切片中hTERC基因扩增情况。2. 选取同一时期相同条件下20例正常或炎症的患者的宫颈石蜡包埋组织进行hTERC基因检测,建立阈值。3.计算各组hTERC基因扩增阳性率,采用卡方检验进行组间比较。4.分别对三组标本的hTERC基因扩增不同异常信号比细胞进行计数,计算不同异常信号比类型细胞数所占总异常信号细胞数的比例。采用卡方检验进行组间比较。结果：1.本研究共收集55例患者宫颈石蜡包埋切片标本,1例标本因石蜡标本组织块过小而舍弃,未纳入研究及结果分析,最后共纳入研究的标本有54例,包括进展组12例,持续组19例,转归组23例。一次杂交成功50例,剩余4例重新预处理后,经过第二次杂交获得成功,杂交成功率为54/54(100%)。2.通过FISH检测20例正常或炎症宫颈石蜡包埋组织切片hTERC基因表达情况,各分析100个细胞,统计出现异常hTERC基因信号的百分比,建立阈值,阈值=平均数+3×标准差,通过计算阈值=8.5%,取整数,即异常细胞数／计数细胞总数≥9则判断为异常,结果为阳性。3.纳入研究的54例CIN Ⅰ患者的宫颈石蜡包埋标本,hTERC基因扩增阳性例数22例,阴性32例。其中进展组hTERC基因扩增阳性12例,无阴性例数；持续组hTERC基因扩增阳性9例,阴性10例；转归组hTERC基因扩增阳性1例,阴性22例。进展组扩增阳性率为12/12(100%)、持续组扩增阳性率为9/19(47.37%)、转归组阳性率为1/23(4.35%),进展组hTERC基因扩增阳性率明显高于转归组。经过Fisher确切概率法计算后,三组hTERC基因扩增阳性率比较差异有统计学意义(P<0.001)。4.纳入研究的54例CIN Ⅰ患者的宫颈石蜡包埋切片标本,每例计数100个细胞,进展组12例,共计数1200个细胞,其中hTERC基因扩增异常信号细胞数573个,扩增异常信号细胞比例为47.75%(573/1200)；持续组19例,共计数1900个细胞,hTERC基因扩增异常信号细胞数456个,扩增异常信号细胞比例为24.00%(456/1900)：转归组23例,计数2300个细胞,hTERC基因扩增异常信号细胞数92个,扩增异常信号细胞比例为4.00%(92/2300)。经Fisher确切概率法,三组hTERC基因扩增异常的细胞比例比较差异有统计学意义(P<0.001)。5.进展组扩增异常信号细胞比2：3、2：4、3：3、4：3、4：4和N：≥5的细胞比例分别为8.55%(49/573)、2.27%(13/573)、32.46%(186/573)、2.44%(14/573)、34.90%(200/573)、19.37%(111/573)；持续组分别23.02%(105/456)、7.24%(33/456)、28.5]%(130/456)、3.07%(14/456)、21.27%(97/456)、16.89%(77/456)：转归组分别为41.30%(38/92)、30.43%(28/92)、21.74%(20/92)、3.26%(3/92)、3.26%(3/92)、0.00%(0/92)。经Fisher确切概率法,其中异常信号比2：3、2：4、4：4和N：≥5的细胞比例三组比较差异有统计学意义(P<0.001)。转归组中异常信号比2：3、2：4的细胞比例高于进展组,进展组中异常信号比4：4和N：≥5的细胞比例高于转归组,转归组中未见异常信号比为N：≥5的细胞。结论：1.FISH技术具有操作简单,重复性好等特点,利用FISH技术能够客观地从基因学角度检测出宫颈癌前病变中不同程度的hTERC基因扩增。2.采用FISH技术检测宫颈石蜡包埋切片的hTREC基因扩增情况,荧光信号满意度以及杂交成功率均较高,结果更具客观性。3. hTERC基因可以预测CIN Ⅰ的进展和转归,可以作为预测CIN Ⅰ进展的指标。4.hTERC基因扩增异常信号比为4：4和N：≥5可能可以用来预测CINⅠ的进展。