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牛干扰素-τ（bIFN-τ）是由早期胚胎滋养层细胞产生的干扰素。它能促进黄体的发育，阻止子宫内膜上溶黄体分子机制的发生，从而启动妊娠过程，在调节妊娠识别向胚胎植入转变过程中发挥着重要作用。
本研究通过选取本实验室构建的原核表达质粒pET-28a-bIFN-τ，扩增了中国荷斯坦奶牛干扰素-τ（bIFN-τ）成熟蛋白基因的编码区（CDS），并在其C-端加入His6-tag，命名为bIFN-τ-His6。运用NCBI的BLASTN、ORF Finder和DNAstar、SignalP-3．0、ProtScale、TMHMM、NetPhos2．0、NetNGlyc1．0、SWISS-MODEL、EMBOSS等工具对该bIFN-τ-His6编码蛋白进行全面的生物信息学分析。结果显示，该基因序列长度为548bp，编码一个182个氨基酸的多肽，其分子量理论值约为20．9KD。ORF534编码肽链具有Ⅰ型IFN家族典型保守结构功能域。该蛋白有七个潜在的磷酸化位点，有一个潜在的N-糖基化位点，二级结构中存在5个主要的疏水区域。空间结构分析表明bIFN-τ-His6肽链构成五个α-螺旋，两个二硫键维持其立体结构。引入的His6-tag增大了该基因与毕赤酵母的偏爱性差异，使毕赤酵母表达该基因时受到一定影响。
本研究中选用pPIC9K作为表达载体，GS115为宿主菌。将扩增的bIFN-τ-His6基因插入pMD18-T载体中，构建pMD18-T-bIFN-τ-His6。将pMDl8-T-bIFN-τ-His6经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后，回收的bIFN-τ-His6基因片段用T4 DNA连接酶插入经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理的pPIC9K中，构建毕赤酵母表达载体pPIC9K-bIFN-τ-His6。将pPIC9K-bIFN-τ-His6经SacⅠ线性化后电转化导入毕赤酵母宿主菌GS115，利用组氨酸缺陷型MM平板和MD平板和含不同浓度G418的YPD平板进行筛选，获得高拷贝子转化子，转化子经表型鉴定为Mut+，且PCR鉴定为阳性。阳性转化子经甲醇诱导表达，在96h表达产物量最大，SDS-PAGE显示表达产物大小均约为25kD，其表达量占菌体总蛋白的20．68％，对诱导pH值进行优化，其在pH7．5时，表达量最大。应用Bio-Rad蛋白质纯化仪，GE的HisTrapTM HP对含有表达蛋白的上清液利用亲和层析进行纯化，SDS-PAGE电泳显示在分子量为25KDa附近有一条明显的电泳带，纯化后的重组融合蛋白的纯度都很高。