目的:从中药白屈菜中提取多糖,优化最佳提取工艺及纯化工艺,并利用此工艺制取精制白屈菜多糖,进行白屈菜多糖的免疫活性研究。为白屈菜多糖的进一步开发利用提供理论依据。方法:(1)以葡萄糖为标品,采用苯酚-硫酸法建立标准曲线,用于测定多糖含量。(2)以多糖得率和多糖含量为指标,采用加权评分法(权重各占50%),分别对料液比、提取时间、提取温度、提取次数、醇沉浓度等单因素进行考察,在确定最佳单因素水平的基础上利用正交试验优化最佳水提工艺。(3)以多糖得率和多糖含量为指标,采用加权评分法(权重各占50%),在最佳水提工艺的基础上,首先确定最佳碱,在分别考察碱浓度、提取时间、提取温度、提取次数等单因素,并在此基础上利用正交试验优化最佳碱提工艺。(4)以多糖得率和多糖含量为指标,采用加权评分法(权重各占50%),首先考察不同种类的酶对提取效果的影响,在确定最佳酶后,分别考察加酶量、酶解p H、酶解时间、酶解温度等单因素,并在此基础上利用正交试验优化最佳酶提工艺。(5)以脱色率和多糖保留率为指标,采用加权评分法(权重各占50%),在查阅相关文献的基础上,利用正交试验分别确定活性炭和双氧水的最佳脱色工艺。(6)以多糖保留率、脱色率和解析率为指标,采用加权评分法(权重分别为40%、30%、30%),在8种大孔吸附树脂中确定最佳树脂,再以脱色率和多糖保留率为指标,采用加权评分法(权重各占50%),分别考察上样浓度、径高比、洗脱剂流速、上样量、洗脱剂用量等因素以确定大孔吸附树脂的最佳纯化工艺。(7)通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫低下小鼠模型,以生理盐水为空白对照组,香菇多糖为阳性对照组,不同剂量的纯化后白屈菜多糖为实验组,分别灌服等体积上述溶液,以腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数以及溶血素和溶血空斑的形成情况为指标,确定白屈菜多糖的免疫活性及最佳剂量。结果:(1)白屈菜多糖最佳水提工艺为:取白屈菜药材粗粉,加入3 0倍量的水,1 0 0℃提取3次,每次4小时。最佳醇沉浓度为8 0%。(2)白屈菜多糖最佳碱提工艺为:白屈菜水提药渣加20倍量0.1 mol/L的N a 2 C O 3溶液,4℃提取1次,每次4小时。(3)白屈菜多糖最佳酶提工艺为:白屈菜药材粉末加入30倍量水,40℃浸泡30分钟,加入5%的果胶酶,调p H至3.0,40℃条件下酶解2小时。(4)活性炭最佳脱色工艺为:白屈菜多糖溶液加入0.5%的活性炭,调p H至3.0,50℃条件下水浴搅拌40min。双氧水最佳脱色工艺为:白屈菜多糖溶液加入10%双氧水,调p H至10.0,50℃条件下水浴反应1h。(5)大孔吸附树脂最佳纯化工艺为:取HPD-600树脂,以径高比1:8装柱,0.04g/ml的多糖样品溶液上样1BV,静置吸附4 h,按流速1.0ml/min用蒸馏水洗脱,洗脱剂的用量为8BV。(6)精制白屈菜多糖可显著提高免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数,促进溶血素和溶血空斑形成,并以0.05g/kg白屈菜多糖组作用最佳。结论:通过本课题所得到的白屈菜提取纯化工艺稳定可靠,其中酶提工艺和大孔吸附树脂纯化工艺效果最佳,多糖得率为16.38%,多糖含量为70.17%,适合工业化生产;药理实验也证明白屈菜多糖能显著提高免疫低下小鼠的免疫活性,有进一步研究的价值。