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本研究分为二部分:
第一部分:多囊卵巢综合征妇女和卵巢功能正常妇女卵巢HOXA10基因表达的研究
目的: 比较PCOS妇女和卵巢功能正常妇女卵巢黄素化颗粒细胞中HOXA10 mRNA、蛋白表达及卵泡液中HOXA10水平的差异,探讨HOXA10基因在卵巢中的表达在PCOS发病可能的作用。
方法:选择体外受精-胚胎移植的妇女77例,其中PCOS妇女35例和卵巢功能正常妇女42例,在超排卵周期的取卵日留取卵泡液,并提取颗粒细胞,采用免疫荧光法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法分别测定HOXA10在卵巢黄素化颗粒细胞中的定位、mRNA和蛋白的表达水平,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定卵泡液中HOXA10的浓度。
结果:(1)免疫荧光检测结果提示HOXA10在PCOS妇女和卵巢功能正常妇女卵巢黄素化颗粒细胞的胞浆和胞核中均有表达。(2)RT-PCR检测结果提示,PCOS妇女黄素化颗粒细胞中HOXA10mRNA的表达显著低于卵巢功能正常妇女(0.4104±0.2738vs0.6503±0.2504,P<0.01)。(3)Western blot检测结果显示,PCOS妇女中黄素化颗粒细胞中HOXA10蛋白的表达也明显低于对照组(0.305±0.106vs0.529±0.089,P<0.05)。(4)ELISA结果提示,PCOS妇女卵泡液HOXA10浓度显著低于卵巢功能正常妇女(0.3003±0.1038vs0.3604±0.1197,P<0.05)。
结论:1. HOXA10基因在人卵巢黄素化颗粒细胞的胞核和胞浆中均有表达。
2. PCOS妇女中卵泡液中HOXA10的浓度、卵巢黄素化颗粒细胞HOXA10 mRNA和蛋白表达水平明显低于卵巢功能正常妇女,提示该基因可能参与了PCOS的发生及发展过程。
第二部分:多囊卵巢综合征妇女 HOXA10表达与体外受精妊娠结局的相关性研究
目的:探讨不同表现型PCOS妇女卵巢黄素化颗粒细胞中HOXA10 mRNA、蛋白表达和卵泡液中HOXA10浓度的差异,及其对IVF-ET结局的影响。
方法:将77例行体外受精-胚胎移植的妇女分为4组:第1组为肥胖型PCOS妇女(BMI>25kg/m2,n=16),第2组为非肥胖型PCOS妇女(BMI≤25kg/m2,n=19),第3组为卵巢功能正常肥胖妇女(BMI>25kg/m2,n=15),第4组为卵巢功能正常非肥胖妇女(BMI≤25kg/m2,n=27)。在超排卵周期的取卵日留取卵泡液,并提取颗粒细胞,采用RT-PCR及Western blot方法分别测定卵巢黄素化颗粒细胞中HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平,并用ELISA法测定卵泡液中HOXA10和睾酮浓度。
结果:(1)RT-PCR检测结果显示,肥胖型PCOS组和非肥胖型PCOS组妇女HOXA10 mRNA的表达水平均低于相应同BMI对照组(0.3025±0.0936vs0.3519±0.1262,P<0.05和0.3762±0.0801vs0.5247±0.1123,P<0.01),肥胖组妇女(PCOS或卵巢功能正常)与非肥胖组妇女(PCOS或卵巢功能正常)颗粒细胞中HOXA10 mRNA的表达无显著性差异(P>0.05)。(2)Western blot检测结果显示,PCOS非肥胖组妇女HOXA10蛋白表达低于相应同BMI对照组(0.324±0.106vs0.430±0.105,P<0.01);肥胖组妇女(PCOS或卵巢功能正常)颗粒细胞中HOXA10蛋白的表达与非肥胖组无显著性差异(P>0.05)。(3)ELISA检测结果显示,肥胖型PCOS组和非肥胖型PCOS组妇女卵泡液HOXA10的浓度均低于相应同BMI对照组(0.2525±0.0936vs0.3319±0.0262,P<0.01;0.2294±0.0825vs 0.3798±0.0362,P<0.05);肥胖组妇女(PCOS或卵巢功能正常)卵泡液中HOXA10的表达与非肥胖组妇女无显著性差异(P>0.05)。(4)相关分析发现卵泡液中HOXA10浓度与基础睾酮水平显著负相关(r=-0.416,P<0.01);卵泡液中HOXA10与睾酮浓度显著负相关(r=-0.4229,P<0.01)。(5)在PCOS组妊娠妇女卵泡液HOXA10的浓度高于未妊娠妇女(0.3943±0.247vs 0.2001±0.137,P<0.05),与之相同,在所有妊娠妇女中卵泡液HOXA10的浓度高于未妊娠妇女(0.4043±0.1373vs0.2151±0.1412,P<0.01)。
结论:1. HOXA10基因表达的异常与PCOS密切相关,与血清和卵泡液中雄激素水平呈负相关,但与肥胖无明显关系。
2. 采卵日卵巢中高水平的HOXA10可预示良好的IVF结局。