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日本乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）是由乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的主要通过三代缘库蚊进行传播的人畜共患传染病。猪一般呈散发、隐性感染,感染率高,死亡率低,处于妊娠期的怀孕母猪表现为发热、流产、产死胎、木乃伊胎,公猪出现睾丸炎和不育等现象,极大程度上损害了现代化养猪业的经济利益。JEV感染人后,患者表现为发热、意识模糊、强直性抽搐等症状,威胁着人类的健康。因此,对猪JE的控制不但能提高养猪业的生产效益,减少损失,而且可为人类的健康提供有力的保障。为筛选出更有效、更适合工业化生产的猪用JE疫苗,本论文将猪源JEV分离株JEV/GD株在Vero细胞上进行增殖,开展病毒增殖条件、病毒灭活条件的优化,确定GD株在Vero细胞上培养的细胞培养液中最佳血清含量为10%、维持血清浓度为2%;最佳接毒剂量为1%、细胞接毒密度为60%80%;最佳接毒方法是异步接毒且收毒时间为90h;灭活条件是0.1%的甲醛灭活24h。结果显示,通过本研究优化条件获得的病毒液TCID50达到107.9/mL。利用收获的病毒液,严格按照中国生物制品规程制备出了猪JEV/GD株油乳剂灭活疫苗,为JE疫苗的进一步研究与应用奠定了基础。为了更好评价JEV/GD株油乳剂灭活疫苗的免疫效力,对5头5周龄的小公猪进行人工感染实验,评价感染小公猪临床发病特征和病毒血症,初步建立了GD株雄性小公猪的人工感染模型。结果表明,JEV/GD株人工感染仔猪后,体温升高至40.5℃左右,部分仔猪出现神经症状、食欲不良、睾丸肿大。剖检发现,发病猪脑充血、脑积液增多,睾丸不同程度充血,附睾和精索充血。采用RT-PCR方法,分别对攻毒后0 d、7 d、9 d、11 d、13 d、15 d、21 d、28 d仔猪血清样品进行病毒血症的检测,结果显示攻毒组和对照组的样品血清中未能检测到JEV病毒。JEV/GD株灭活疫苗的免疫效力试验表明,抗原含量高的疫苗免疫仔猪抗体产生较早,最早14 d能检测出JEV抗体,免疫后21 dJEV抗体转阳率增高,免疫后35 d抗体阳性率最高,二次加强免疫后JEV抗体水平大幅度提高。说明了该灭活疫苗免疫猪如果仅免疫一次,抗体水平低,第二次加强免疫后抗体水平有很大的提升,且持续期长。由此可知,本研究制备的猪JEV/GD株油乳剂灭活疫苗有着良好的免疫原性、安全性高、抗体持续期长等特点和巨大的市场应用前景。