论文部分内容阅读
目的:观察桂枝挥发油及其主要成分桂皮醛体内、外对甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)增殖的影响,并探讨其TLR/IFN信号通路机制,阐释解表药“辛散解表”性效的科学内涵。方法:①细胞培养法:以流感病毒感染狗。肾传代细胞(MDCK)为载体,观察2种药物对流感病毒增殖的抑制作用;MTT法检测受试药对MDCK细胞的半数中毒浓度(TC50)及最大无毒浓度(TCo);血凝法测定流感病毒对MDCK细胞的感染性;MTT法和细胞病变法(CPE)测定药物体外抑制流感病毒增殖的有效浓度(IC50)和治疗指数(TI)。②鸡胚法观察药物抗流感病毒作用:分别以预防给药和治疗给药2种方式,经鸡胚尿囊腔和卵黄囊两种途径将不同浓度的药物注入鸡胚,孵育72h后收取鸡胚尿囊液进行血凝试验来评价药物在鸡胚内的抗病毒效应。③采用病毒性肺炎模型小鼠观察药物在整体动物中的抗流感病毒作用:分别以预防和治疗2种方式给药,观察2种药物对病毒性肺炎模型小鼠的死亡保护率、肺指数、肺组织病毒滴度以及病理形态学的影响来评价药物在小鼠体内的抗流感病毒效应。④采用RT-PCR和ELISA方法观察药物对染毒MDCK细胞IFN-β表达情况的影响。⑤应用RT-PCR技术,观察药物对染毒MDCK细胞TLR3、TLR7、IRAK-4、TRAF-3mRNA表达水平的影响。结果:①桂枝挥发油及桂皮醛对MDCK细胞的TC50均为0.5×10-5ml/ml,TC0为0.25×10-5ml/ml;桂枝挥发油及桂皮醛能抑制流感病毒的细胞内增殖,其IC50分别为5.894×10-8ml/ml与5.317×10-8ml/ml,T1分别为84.43、90.04;桂枝挥发油及桂皮醛对流感病毒亦具有明显的直接杀灭作用,其IC50分别为1.849x10-7、5.770×10-7ml/ml,T1分别为27.04、9.51。②与病毒对照组比较,桂枝挥发油0.1x2-14ml/胚剂量,桂皮醛0.1×2-14ml/胚、0.5×2-15ml/胚、0.25×2-15ml/胚剂量经尿囊腔途径治疗方式给药能使鸡胚尿囊液中血凝滴度明显降低(P<0.01);桂皮醛0.1×2-14ml/胚、0.5×2-15ml/胚、0.25×2-15ml/胚剂量经卵黄囊途径预防与治疗方式给药使尿囊液中病毒血凝滴度均显著降低(P<0.05)。③与模型对照组比较,桂枝挥发油0.348ml/kg剂量预防给药5d对病毒性肺炎小鼠的死亡保护率达到20%(P<0.05);桂枝挥发油0.348ml/kg、桂皮醛0.264ml/kg及0.132ml/kg剂量治疗方式给药5d,对病毒性肺炎小鼠的死亡保护率分别为30%、20%、25%(P<0.01,P<0.05)。④与模型对照组比较,桂枝挥发油0.174ml/kg、桂皮醛O.132ml/kg治疗给药5d,对小鼠肺指数抑制率分别为26.7%和27.4%(P<0.05)。桂枝挥发油0.348ml/kg、桂皮醛、0.264ml/kg治疗给药5d,能明显降低病毒感染小鼠的肺组织血凝滴度;各剂量组药物在治疗给药5d,对病毒性肺炎模型小鼠肺脏炎性病变有一定程度的改善作用;⑤与病毒对照组比较,桂枝挥发油和桂皮醛0.25×105ml/ml浓度显著升高染毒MDCK细胞上清液中IFN-B含量(P<0.05), IFN-β mRNA的表达也显著提高(P<0.05)。⑥与病毒对照组比较,桂枝挥发油和桂皮醛0.25×10-5ml/ml浓度显著提高染毒MDCK细胞内TLR7、IRAK-4、IFN-β mRNA表达水平(P<O.01)。结论:桂枝挥发油及桂皮醛在细胞水平、鸡胚水平、整体动物中均表现出对H1N1流感病毒的增殖有显著抑制作用。其抗病毒作用机制可能与其激活TLR7通路,活化IRAK-4,诱导IFN-β高表达有关。