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目的：制备小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),观察其在体外对小鼠乳腺癌细胞(EMT-6)生长、凋亡及致瘤性的影响；将BMSC联合白细胞介素-12真核表达质粒(pcDNA6/IL-12)于乳腺癌荷瘤小鼠瘤体内共同注射,探讨二者联合应用对荷瘤小鼠的治疗作用。方法：(1)小鼠BMSC的原代培养及其鉴定：采用差速全骨髓贴壁法培养原代小鼠BMSC,采用形态学和成骨诱导茜素红染色钙结节法对其鉴定。(2)制备BMSC条件培养基,分别配置成(25%,50%,75%,100%)四种不同浓度。作用EMT-6细胞24,48,72h后,CCK-8法检测在不同浓度BMSC条件培养基的作用下,EMT-6细胞增殖的情况；流式细胞术(Annexin V-FITC/7-AAD双染色法)检测在BMSC条件培养基培养条件下EMT-6细胞凋亡的情况。(3)BMSC条件培养基处理过的EMT-6细胞接种昆明种小鼠,于第4、6、8、10、12、14、16d测量肿瘤的大小。第17d处死小鼠,取出小鼠肿瘤并称重,将肿瘤组织制作成石蜡切片,用苏木精-伊红(HE)染色及病理学观察。(4)建立小鼠乳腺癌荷瘤模型,待肿瘤直径达到5-8mm(约4d)将小鼠随机分为4组。分别为阴性对照组(瘤内注射PBS)；BMSC组(瘤内注射BMSC);IL-12组(瘤内注射pcDNA6/IL-12质粒)；BMSC联合IL-12组(瘤内注射BMSC和pcDNA6/IL-12质粒)。观察小鼠肿瘤的生长情况,每隔两天测量肿瘤的长短径,计算肿瘤的大小。第17d处死小鼠,无菌条件下剥取瘤体和脾脏并称质量,计算脾指数和抑瘤率。MTT法检测脾淋巴细胞的增殖活性,LDH法检测脾淋巴细胞的杀伤活性,HE染色观察肿瘤组织的病理学改变。结果：(1)成功培养小鼠BMSC,取P3代细胞进行成骨诱导,茜素红染色钙结节为阳性。(2)随着BMSC条件培养基浓度的升高以及作用时间的延长,EMT-6细胞的增殖抑制率由(6.8土0.02)%上升到(29.8±0.05)%,凋亡率由(2.3±0.2)%上升到(25.4±0.3)%。(3)BMSC条件培养基处理的EMT-6细胞致瘤性明显减弱,肿瘤的体积明显变小(P<0.05)。组织病理学观察可见实验组肿瘤组织大片坏死。(4)BMSC单独应用及其与pcDNA6/IL-12联合应用可导致荷瘤小鼠肿瘤的体积缩小(P<0.01),脾淋巴细胞增生反应及杀伤活性增强(P<0.05)。肿瘤坏死区扩大并且有大量炎性细胞浸润。结果显示BMSC联合pcDNA6/IL-12应用可显著提高实验小鼠抗肿瘤细胞免疫力,获得更好的治疗效果。结论：本研究成功制备出了小鼠BMSC细胞。体内外研究证明,BMSC对小鼠乳腺癌细胞EMT-6具有抑制增殖、促进凋亡及降低其致瘤性作用。BMSC与质粒pcDNA6/IL-12联合应用增强小鼠的抗肿瘤细胞免疫力,发挥更强的抗肿瘤作用。