GCP-2在小鼠铜绿色假单胞菌肺炎中作用的研究

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目的:通过研究粒细胞趋化蛋白-2( granulocyte chemo-tactic protein-2, GCP-2/CXCL6)在铜绿色假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)肺炎模型小鼠肺组织中的表达及GCP-2与白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、转化生长因子β1(transforming growth factor—beta1, TGF-β1)之间的相关性,探讨GCP-2在铜绿色假单胞菌肺炎的可能作用,以期为铜绿色假单胞菌肺炎的治疗寻找到新的思路。方法:1.选择健康成年清洁级雄性昆明小鼠(18-22g)45只,随机分为对照组,肺部感染组,抗 GCP-2抗体干预组,每组各15只。空白对照组:在造模前12小时自腹腔注入2ml的生理盐水,给予氯胺酮(腹腔内注射100mg/Kg)麻醉,然后固定在无菌操作台上,消毒铺巾,使用无菌注射器在气管环状软骨间隙处穿刺,然后滴入无菌生理盐水0.2ml;肺部感染组,在造模前12小时自腹腔注入2ml的生理盐水,氯胺酮麻醉后固定,使用无菌注射器在气管环状软骨间隙处穿刺,然后滴入铜绿色假单胞菌菌液0.2ml(2个麦氏单位浓度6×108cFu/ml);抗GCP-2抗体干预组:在造模前12小时自腹腔注入2ml含有0.15ml抗GCP-2抗体(浓度为1mg/ml)的生理盐水,氯胺酮麻醉后固定,使用无菌注射器在气管环状软骨间隙处穿刺,然后滴入铜绿色假单胞菌菌液0.2ml(2个麦氏单位浓度6×108cFu/ml)。2.造模成功后,分别取3、9、24小时3个时间点,从三个实验组中随机抽取5只小鼠,分别处死,结扎左肺,取少许左肺组织制成肺组织匀浆,用接种环将少许接种于血琼脂平板上,倒置放入37 ℃ CO2恒温培养箱中培养24小时,其余左肺组织经10%甲醛溶液固定,石蜡包埋后切片行 HE染色,然后将标本进行炎症范围及程度的比较,右肺在无菌状态下进行肺泡灌洗,留取灌洗液,用ELISA法检测灌洗液中的GCP-2、IL-10及TGF-β1。3.使用SPSS20.0软件进行数据统计及分析。结果:1.感染组与干预组小鼠的肺组织炎症病理改变最明显,与空白对照组存在明显差异,但干预组病理改变较感染组减轻,特别是随时间增加两组差异越明显,干预组与感染组病理评分比较差异具有统计学意义(P<0.017);2.三组肺泡灌洗液中均检出 GCP-2,感染组中 GCP-2表达最为明显,干预组较空白对照组有所升高,但较感染组相比明显降低(P<0.001),感染组中 GCP-2表达量随时间越来越高,但给予抗 GCP-2抗体干预后越来越低,同时炎症反应也随之减轻,与GCP-2表达量趋势相一致;3.三组肺泡灌洗液中均有 IL-10及TGF-β1表达,感染组与干预组较空白组比较明显升高,有显著统计学意义;干预组IL-10及TGF-β1较感染组明显降低,两组比较有统计学意义(P<0.001),且 IL-10及 TGF-β1的表达与GCP-2水平有明显相关性(P<0.001)。结论:GCP-2可促进炎症反应,加重小鼠铜绿色假单胞菌肺炎的炎症程度,使用抗 GCP-2抗体封闭GCP-2后,小鼠铜绿色假单胞菌肺炎的炎症程度减轻;GCP-2在小鼠铜绿色假单胞菌肺炎中的作用可能与IL-10及TGF-β1有关。
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