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细胞壁是植物细胞结构的重要组成成份,具有稳定细胞形态、减少机械损伤等功能。纤维素作为植物细胞壁的主要成分,在细胞壁生物合成途径中发挥重要作用。COBRA基因家族因参与细胞壁合成,探究其家族成员对果实发育及成熟的作用富有意义。有研究指出,番茄SlCOBRA-Like基因在果实发育早期高度表达且表达量随成熟度增加而降低。同时,该基因转入番茄中会产生同源共抑制现象。因此对玉米BK2L3基因进行初步研究,以期以基因工程手段延长番茄果实货架期,同时消除同源共抑制现象。 玉米BK2L3基因是COBRA基因家族的成员之一。本研究利用RT-PCR技术从玉米cDNA中扩增出玉米BK2L3基因全长,导入启动子为果实特异表达的TFM7植物表达载体pBI121上,构建玉米BK2L3基因果实特异表达的过量表达载体后,通过农杆菌介导的方式转入野生型番茄中,经阳性鉴定,获得BK2L3转基因植株。 本研究分别以野生型番茄和玉米BK2L3转基因植株果实为研究对象,进行初步分析。通过分析玉米BK2L3在果实中的表达情况,观察绿熟期果实果皮细胞壁结构,测定红熟期果实的硬度、货架期和果皮纤维素含量,探究玉米BK2L3基因的功能。半定量RT-PCR分析结果表明:玉米BK2L3基因在转基因番茄植株中有较高表达,在野生型番茄植株中没有表达。转基因番茄果实的硬度、果皮纤维素含量明显高于野生型番茄。显微观察石蜡切片显示:转基因番茄果皮厚度与野生型相比,明显增厚,细胞大小均匀。而且,转基因番茄果实在贮藏期间失水率降低,有效延长果实货架期。因此,BK2L3基因的过量表达与细胞壁代谢和货架期有关,有利于改良番茄果实的品质。同时,玉米BK2L3基因以外源基因方式转入番茄可有效避免同源共抑制现象,促进基因的高效稳定表达,减少株系差异,为反向遗传学的研究进一步提供便利。