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本论文采用NIAAA酒精性脂肪肝模型,虾青素膳食添加的方法旨在探究虾青素对酒精性脂肪肝的作用及其机制,为酒精性脂肪肝患者提供膳食营养指导,并为功能性食品的开发提供依据。将8周龄健康雄性C57BL/6小鼠,随机分为正常对照组(对照组)、酒精性脂肪肝模型组(模型组)和虾青素干预组(虾青素组),每组12只(n=12)。建立NIAAA模型模拟酒精性脂肪肝,按照200 mg/L饲料的剂量添加虾青素进行饮食干预。收集小鼠肝脏和血液,比较各组小鼠的肝指数,对肝脏组织进行苏木紫-伊红染色和油红O染色,观察肝脏组织损伤和脂质堆积情况。利用生化分析仪对小鼠血清中肝损伤指标:谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和血脂四项:甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度胆固醇(HDL-c)、低密度胆固醇(LDL-c)进行检测;采用商业试剂盒测定肝脏甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)含量;采用蛋白免疫印迹法检测肝脏脂肪代谢基因固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c),过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)和肝脏氧化应激相关酶活性,即细胞周期色素CYP2E1、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及自噬相关基因LC3、P62和mTOR蛋白;利用Luminex技术、实时定量PCR法检测炎症相关细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10、IL-22和PAI-1的表达。实验结果表明,虾青素膳食添加可有效减轻酒精诱导的小鼠肝脏损伤和脂肪变性。表现为虾青素使肝脏指数降低,血清ALT、AST活性降低以及肝脏组织病理形态变化的改善。并且,虾青素可有效降低血清和肝脏中TG、TC的水平,提高血清HDL水平,增强肝脏脂肪酸氧化基因PPARα转录活性,降低调控脂肪酸合成的基因SREBP-1c转录活性,缓解酒精性脂肪肝的进程。酒精代谢会造成肝脏氧化应激,使脂质过氧化标记物MDA含量增加,CYP2E1酶表达增高而抗氧化酶SOD、CAT、GPx表达降低。虾青素膳食添加有效逆转了这些反应,使抗氧化酶SOD、CAT、GPx表达增加,MDA和CYP2E1含量降低。此外,虾青素还可以有效抑制酒精诱导的炎症反应,降低炎症因子TNF-α、IL-6、PAI-1的表达。虾青素膳食显著增加了LC3-II/LC3-Ⅰ蛋白表达的比值,降低P62蛋白的堆积,说明其有效改善了酒精造成的肝脏自噬抑制。检测自噬重要通路信号mTOR蛋白,发现没有显著变化,说明酒精诱导的自噬抑制并不是通过mTOR调控的,我们猜测虾青素可能是通过清除酒精的代谢产物和抑制CYP2E1活性来改善酒精造成的自噬损伤。本研究首次证明了虾青素具有保护小鼠酒精性脂肪肝的作用,其作用机制可能是通过增强脂肪酸氧化基因PPARα,抑制酒精造成的氧化应激和自噬损伤以及炎症因子的表达。虾青素作为安全有效的活性成分,或许可以将富含虾青素的食物列入嗜酒者食谱中,或将虾青素添加至相关功能性食品中以更好地预防、改善酒精性脂肪肝。