前言 细胞外基质(extracellular matrix，ECM)是细胞之间的物质，构成细胞生活的微环境，具有支持、连结、营养、防御和保护等作用。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinstes，MMPs)是一种内肽酶家族，通过降解细胞外基质参与多种生理病理过程。基质金属蛋白酶-8(MMP-8)是MMPs中的一种，其作用底物为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原。胶原与机体组织细胞的分化、成熟和损伤修复等密切相关。MMP-8主要功能是降解胶原，且降解Ⅰ型胶原的能力最强。年轻恒牙处于牙齿发育的重要阶段，因此有必要对该时期牙髓中MMP-8及胶原的表达及相关关系进行研究。本实验研究目的是研究MMP-8及Ⅰ型胶原在牙齿发育中的表达和作用。 材料和方法 牙髓标本取自健康牙齿。所有研究对象均无全身系统性疾病，近三个月未曾服用免疫制剂和抗菌药物。按牙根发育阶段将牙髓分为3组，即牙根开始发育组、牙根发育中组及根尖闭合组。牙齿拔除后立即将牙齿纵向劈开，完整取出牙髓组织，放入4％的多聚甲醛液中，4℃下固定48小时。梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。制备冠根纵向连续石蜡切片，厚5μm。进行Ⅰ型胶原和MMP-8免疫组化染色(兔抗人Ⅰ型胶原、MMP-8多克隆抗体，SABC法)，空白实验以0.01MPBS代替一抗，其余染色步骤相同。利用coolsnapfx显微照相系统(Roper，Japan)及MetaMorph分析软件(UIC，US)对免疫组化染色标本进行图像分析。 实验结果 1型胶原免疫组织化学染色表明其存在于牙髓中的成牙本质细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞胞浆，血管壁周围及细胞外基质中。在三组之中，牙根刚开始发育组染色最强，根尖孔闭合组染色最弱，根尖孔闭合前后差异有统计学意义汀＜o．01人牙髓外周与牙髓中心区的表达强弱无统计学差异（P＞O．05人＊＊P－8的免疫组化染色表明MMP－8存在于牙髓中的成牙本质细胞胞浆。成纤维细胞胞浆、血管内皮细胞胞浆、前期牙本质、血管壁周围及细胞外基质中。在三组之中，牙根刚开始发育组染色最强，根尖孔闭合组染色最弱，但在根尖孔闭合之前两组间差异无统计学意义汀＞0·05广它们与根尖孔闭合组差异有统计学意义｛ P＜0·05人1型胶原与＊＊P－8的表达呈正相关关系卜＝O．6乃，0＜r＜1人 讨 论 在本实验中各组成牙本质细胞均有1型胶原的阳性染色，随着牙根的发育，染色变弱，提示成牙本质细胞具有分泌1型胶原的能力，随着牙根的发育，成牙本质细胞分泌二型胶原的能力减弱，I型胶原合成减少。本实验发现在年轻恒牙牙髓细胞外基质中1型胶原的表达均呈阳性，它们呈网状或条索状分布。虽然镜下可见牙髓外周有明显阳性染色带，但是牙髓外周与中心部二型胶原表达无统计学差异，可能与牙髓中心区血管较多，而且血管壁可见1型胶原阳性包绕有关。越是牙根发育早期，I型胶原表达越强烈，根尖孔闭合时其表达明显减弱，这可能是与牙根闭合以前牙髓细胞丰富、产生胶原的能力强有关。牙髓中除了成牙本质细胞，部蛐纤维细胞胞浆染色阳性。推测成纤维细胞是牙髓细胞外互型胶原来源的主要途径。 本实验首次采用免疫组化的方法对人的不同发育阶段牙髓中 ·二·MMP－8的表达进行研究。发现在成牙本质细胞的胞浆、大部分的血管壁周围及部分成纤维细胞中MMP－8呈阳性染色，这一结果为MMP－8存在于中性白细胞以外的其他细胞提供了又一直接证据。本实验显示前期牙本质中MMP－8呈阳性表达，而在牙本质中表达呈阴性。MMP－8可能参与牙本质矿化前某些组分降解、清除这一过程。我们还发现牙髓细胞外基质中有MMP－8阳性染色。部分成纤维细胞胞浆中有MMP－8表达，考虑成纤维细胞可能是牙髓细胞外基质中MMP－8的主要来源。推测成纤维细胞既合成胶原也降解胶原。年轻恒牙牙髓中MMP－8的表达强于根尖孔闭合组，可见越是胶原分泌旺盛时期它的表达也越强。推测它可能通过对胶原的降解来维持正常牙髓中胶原量的稳定。 本实验研究表明MMP－8与牙髓中1型胶原的表达呈正相关关系，可见MMP－8是牙齿发育各个时期 1型胶原表达的调解因素。但是MMP－8与牙髓中其它类型胶原的关系、牙齿发育中MMP—8是否对调节各发育时期胶原内部构成比起一定作用还有待研究。 结 论 1牙本质和前期牙本质中1型胶原主要是由成牙本质细胞分泌的，且随着牙齿发育，成牙本质细胞分泌胶原能力减弱。 2．MMP－8参与牙齿成熟过程。 3．MMP－8参与牙齿发育中1型胶原的降解，维持牙髓中1型胶原的稳定。