甘露聚糖肽对细胞因子诱导的杀伤细胞的活性的影响

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目的甘露聚糖肽(?)nannatide)是一种生物反应修饰物,是从健康人口腔分离的α-溶血性链球菌(a-hemolytic Streptococcui)33号菌株经深层培养,发酵提取而得到的一种多糖肽类物质,兼具较强的的免疫活性及抗肿瘤作用的双重生物学特性。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells, CIK)是利用人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子如重组人白介素2(IL-2)、重组人Y干扰素(IFN-γ)和抗人CD3单克隆抗体(anti-CD3mab)等诱导而获得的一群异质细胞。其主要的效应细胞为CD3+CD56+细胞,CIK是一种新型、高效、兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤特点的免疫效应细胞,在肿瘤过继性免疫治疗中显露出巨大的应用价值。目前有关甘露聚糖肽能否增强CIK的增殖及杀伤活性研究报道较少,本研究通过观察甘露聚糖肽作用后CIK的增殖及对于K562、Raji细胞株的杀伤活性的变化,初步探讨甘露聚糖肽对人CIK的杀伤活性的影响并探讨相应机制,为甘露聚糖肽应用于过继性免疫治疗提供实验和理论依据。方法抽取健康供血者外周血,分离单个核细胞(PBMC),常规制备CIK细胞,收集培养14d的CIK细胞加入不同浓度的甘露聚糖肽培养48h作为实验组,对照组不添加甘露聚糖肽。用倒置显微镜观察实验组及对照组CIK细胞形态学变化;MTT法检测细胞增殖率;FCM法检测免疫表型及CD3+CD56+细胞表达以及CIK细胞表面NKG2D含量,FCM法检测CIK细胞颗粒酶与穿孔素的表达;LDH释放法测定CIK细胞对于K562、Raji细胞株杀伤活性。结果各实验组的甘露聚糖肽均可促进CIK细胞增殖,并呈浓度依赖性;并可上调CIK细胞表面NKG2D受体表达(P<0.05);其分泌颗粒酶、穿孔素的能力亦显著高于对照组(P<0.05);经甘露聚糖肽作用的CIK细胞对于K562、Raji细胞株的杀伤活性明显升高(P<0.05)。结论甘露聚糖肽有望作为CIK免疫活性的增强佐剂,但应进一步研究其确切机制。
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