论文部分内容阅读
目的:探讨不同浓度西罗莫司(SRL)对马兜铃酸(AA)引起的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E)结构损伤的影响及其可能的机制。 方法:采用MTT比色法观察不同浓度0、0.1、1、10、50、100、200、500、1000nmol/L SRL对NRK-52E细胞的增殖抑制;采用LDH法检测上述浓度SRL对NRK-52E细胞的毒性。本实验SRL终浓度选用≤100nmol/L由上述方法得出。加入适当SRL使各实验组培养液中SRL浓度分别为0、0.1、1、10、50、100nmol/L，刺激NRK-52E细胞12h后分别加入40ug/ml AA继续培养48h，另设空白对照组，分别用Hoechst33342荧光染色观察各组细胞凋亡的形态学变化，流式细胞仪(FCM)检测各组NRK-52E细胞凋亡比例，酶标仪法检测各组caspase-3表达活性。 结果: 1.MTT试验显示SRL浓度在100nmol/L及以下时细胞增值抑制率在5％以下，200、500、1000nmol/L时增值抑制率分别为8.6％、12.1％和17.2％。LDH试验提示SRL浓度在100nmol/L以下时细胞毒性指数小于5％，200、500、1000nmol/L细胞毒性指数分别为9.2％、16.5％和21.9％。 2.Hoechst33342荧光染色可见从组出现大量细胞核染成亮蓝色，染色质出现边集的凋亡细胞，空白对照组凋亡细胞则显著减少。10nmol/L以下SRL溶液组NRK-52E凋亡与从组相比无明显变化，10nmol/L及以上SRL溶液组NRK-52E凋亡与AA组相比有所减少，且随浓度梯度增加趋势愈明显。 3.流式细胞术检测各组细胞凋亡比例如下:空白对照组:0.9％;AA组:30.1％; AA+0.1 nMSRL:29.9％; AA+1.0nMSRL;24.9％;AA+10 nMSRL:15.0％; AA+50 nM SRL:13.2％; AA+100 nM SRL:10.9％。 4.各试验组caspase-3活性测定OD值如下:空白对照组:0.39; AA组:1.0; AA+0.1 nM SRL:0.99; AA+1.0 nM SRL:0.98; AA+10 nM SRL:0.92;AA+50 nM SRL:0.79;AA+100 nM SRL:0.68。 结论: 1.SRL浓度在100mmol/L及以下时对NRK-52E细胞增殖无明显抑制及毒性作用，200mmol/L及以上浓度时增殖抑制及毒性作用明显。 2.10nmol/L以下浓度SRL对马兜铃酸引起的NRK-52E细胞凋亡无明显影响。10-100nmol/L浓度的SRL液对马兜铃酸引起的NRK-52E细胞凋亡有保护作用，并与浓度变化呈正相关。可能是通过抑制caspase-3酶原蛋白激活，从而减少细胞凋亡。