【摘 要】
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犬瘟热(canine distemper,CD )是由犬瘟热病毒(canine distemper virus, CDV )引起的一种高度接触性传染病。该病的传染性强,发病率高,临床症状多样,容易继发其他细菌、病毒
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犬瘟热(canine distemper,CD )是由犬瘟热病毒(canine distemper virus, CDV )引起的一种高度接触性传染病。该病的传染性强,发病率高,临床症状多样,容易继发其他细菌、病毒的混合感染和二次感染,死亡率可高达80%。本研究利用杂交瘤技术制备出CDV单克隆抗体,得到了3株效价较高的单克隆抗体。试验结果如下:采用电镜技术进一步研究了此株病毒在Vero细胞上增殖规律和致病特点。结果表明:CDV感染细胞后主要表现细胞变性、坏死、空泡化、合胞体形成和包涵体处出现。感染后4d可见包涵体,8d可见核内包涵体,其增殖条件是37℃培养5~6d。电镜观察发现,病毒的形态发生过程与文献报道相符。电镜观察可见成堆存在的核衣壳结构,胞膜上出芽增殖明显可见,早期包涵体以核衣壳结构聚集为主,后期还可见到电子致密小体,与文献报道的CDV更为接近。将CDV免疫BALB/C小鼠的脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇的作用下融合,ELISA法筛选,有限稀释法克隆3次,得到3株分泌CDV单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别是:1F3、2A6、2F7。其中两株分泌IgG1、一株分泌IgG2b,连续传代30代,均能稳定分泌CDV-McAb。3株杂交瘤培养上清液效价分别达到1∶3236,1∶1600和1∶1600。将杂交瘤细胞注射BALB/C小鼠诱生腹水,腹水效价都在6×105以上,其中和抗体效价介于:1:1600~1:6125之间。特异性测定结果表明,3株CDV- McAb只与CDV反应,而不与CPV等病毒发生反应。
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