对虾白斑综合征病毒(WSSV)是危害全球对虾养殖业的主要病原微生物之一。自1992年以来,已经对该病毒及对虾白斑综合征进行了大量的研究。目前已经得到WSSV基因组全序列,从而为病毒功能基因的研究以及病毒侵染机理的研究奠定了基础。VAP1是定位在WSSV囊膜上的一个蛋白,由281个氨基酸组成,没有糖基化。通过试验论证,目前已经可以确认该蛋白是病毒侵入对虾细胞的一个重要的黏附蛋白。 本研究对VAP1基因进行了分析和设计改造,旨在通过基因的优化提高其在毕赤酵母中的表达量。改造的内容主要包括以下几方面: 1 选择毕赤酵母偏爱密码子,使得VAP1基因的密码子符合毕赤酵母在表达蛋白时对密码子的偏爱。 2 碱基含量调整,避免A+T富集。 3 酶切位点分析及密码子整。 4 酶的星号活性分析及密码子调整。 5 内含子分析及密码子调整。 其次,在基因改造的基础之上,对改造后的基因VAP1part进行全基因合成,并将合成的基因克隆至酵母表达载体pGAPZαA,之后导入大肠杆菌DH5α进行重组质粒的筛选和保存。在通过PCR鉴定、酶切分析鉴定和DNA测序分析确定得到了所需的重组质粒之后,再将该质粒导入巴氏毕赤酵母,构建了重组毕赤酵母菌。 最后,本研究还就实验室简易扩大培养进行了初步的探讨。