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自由基在体内过度积累会引起机体的氧化和众多疾病,如肝损伤、衰老和肿瘤等。Anastatin B是含生草(Anastatica hierochuntica)中提取得到的一种黄酮类化合物,有报道显示Anastatin B衍生物对大鼠的原代肝细胞损伤具有一定保护作用。本课题组前期首次用化学法成功合成Anastatin B衍生物compound 1及compound 2。本论文以compound 1和2为研究对象,利用体外化学评价法和细胞氧化损伤模型评价了候选化合物的抗氧化活性,并运用CCl4诱导的小鼠肝损伤模型评价这两个化合物的保肝活性,并对其保肝机制进行了初步研究。首先,利用体外化学法评价了 compound 1和2的总还原能力、ABTS·自由基清除能力及DPPH·自由基清除能力。实验结果显示:compound 1和2的总还原能力分别为221.56 g/mol和193.66 g/mol;ABTS·自由基清除力的EC50值分别为2.40mM和2.74 mM;DPPH·自由基清除力的Ec50值分别为0.13 mM和0.16 mM。以上结果说明:compound 1和2都具有良好的体外抗氧化活性和清除自由基的能力。其次,进一步在细胞水平上验证了 compound 1和2的细胞毒性及对H2O2诱导PC-12细胞氧化损伤的保护作用。实验结果显示:单独使用100 μM的compound 1或2处理PC-12细胞48 h后,细胞的存活率分别为31.96%和60.77%,说明compound 2的细胞毒性较小;当使用1 μM的化合物对PC-12细胞进行预保护时,compound 2处理组能有效的抑制H202诱导的PC-12细胞氧化损伤,细胞存活率为93.75%,是compound 1处理组细胞存活率(35.77%)的2.6倍。以上结果说明:与compound 1相比较,compound 2的细胞毒性更低,对H2O2诱导PC-12细胞氧化损伤的保护作用更强。最后,利用四氯化碳(CC14)诱导的小鼠急性肝损伤模型评价了 compound 1和2的保肝活性。实验结果显示:与CCl4模型组相比,compound 1预处理组和compound 2预处理组的肝损伤指标如ALT、AST、LDH、MDA的活性和含量明显降低,而对肝损伤起保护作用的GSH含量显著升高,且compound 2预处理组的保护效果效果优于compound 1(p<0.01)。HE染色的结果也与以上实验结果一致,两个化合物预处理组的肝组织受损程度明显减轻,且compound 2预处理组的保护效果优于compound 1。此外,炎性细胞因子TNF-α的检测结果显示:compound 1和2预处理后TNF-α均明显降低(p<0.05),compound 2具有更强的抑制TNF-α生成的活性。CYP2E1的检测也显示出相同趋势。这可能是compound 1和2发挥抗氧化作用和保肝活性的作用机制之一。综上所述,compound 1和2在体外水平、细胞水平和整体水平都具有良好的抗氧化和肝损伤保护作用,其作用机制可能与抑制炎性细胞因子TNF-α的表达和一只CYP2E1的表达有关。compound 2在三个水平的实验中均表现出更高的活性作用,今后将深入地研究其抗氧化作用及肝损伤保护作用的机制。