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目的：以鼻咽癌CNE-1细胞为研究对象，通过高效液相色谱法（HPLC）和激光共聚焦显微镜(CLSM)技术考察不同微环境下大黄素的细胞药代动力学特征，探讨两种检测手段在细胞药代动力学研究中的优缺点。方法：1.建立测定细胞内大黄素含量的HPLC法，并进行验证；2.HPLC法测定不同微环境下细胞对大黄素摄取和消除；3.CLSM技术观察细胞在不同微环境下对大黄素的摄取、分布及细胞形态学改变。4.CLSM技术测定大黄素作用后细胞内活性氧含量及线粒体自噬水平。5.MTT法测定大黄素对鼻咽癌细胞的生长抑制作用。结果：1.所建立HPLC方法的色谱条件：色谱柱：Shim-pack VPC18(3.9mm×150mm,4μm),流动相：甲醇-0.1%磷酸（85:15），检测波长254nm,柱温：室温，流速：1.0ml.min-1。结果大黄素在2μg.ml-1-32μg.ml-1浓度范围内呈良好的线性关系,标准曲线方程为：Y=27416X+2719, R2=0.9992;精密度RSD为2.01%、2.26%、1.65%；日内稳定性RSD为0.96%、2.22%、1.14%，日间稳定性RSD为1.16%、2.2%、2.15%；检测限90ng.ml-1；定量限为380ng.ml-1；2.5、5、10μg.ml-1三个浓度的加样回收率分别为91.45%、93.48%、89.46%；与其他处理组相比，超声裂解120min后检测药物含量最高。2.60min左右细胞摄取大黄素量达峰值；大黄素浓度在10、20、40μg.ml-1时摄取量呈现浓度依赖性，在无血清培养条件下的细胞对不同浓度大黄素的摄取量分别为0.021±0.001μg.μg-1、0.049±0.001μg.μg-1、0.066±0.002μg.μg-1,高于相应浓度有血清培养时摄取量0.017±0.002μg.μg-1，0.041±0.005μg.μg-1，0.052±0.003μg.μg-1（p<0.05）;乏氧培养条件下细胞对20μg.ml-1大黄素摄取量0.056±0.009μg.μg-1高于正常培养下摄取量0.048±0.022μg.μg-（1p<0.05）；浓度为1mg.ml-1的叠氮钠处理下，大黄素浓度为10、20μg.ml-1时的细胞摄取量分别为0.031±0.002μg.μg-1、0.092±0.011μg.μg-1均高于对应浓度下无叠氮钠作用时的摄取量0.025±0.003μg.μg-1、0.051±0.005μg.μg-1（p<0.05）。清除结果显示，30min内细胞清除大黄素迅速，随后缓慢，240min时细胞内药物浓度相对稳定。3.采用CLSM技术测定细胞对大黄素摄取时，无论单独培养或共培养，在乏氧及无血清条件下摄取大黄素后，其荧光强度值最大(P<0.05)，达到最大荧光强度所需时间最短(P<0.05)；对应条件单独培养时摄取大黄素达最大荧光强度所用时间比共培养短(P<0.05)；CNE-1细胞在乏氧条件下摄取大黄素900s后，细胞出现皱缩、变圆、起泡等形态学的改变，而正常培养条件下CNE-1细胞在相同时间内未出现明显的形态学变化。大黄素主要以颗粒状分布在胞浆，较少进入细胞核。4.在乏氧条件下，大黄素进入CNE-1细胞后，活性氧水平急剧升高，对乏氧细胞的生长抑制作用增加，乏氧和不乏氧情况下半数抑制浓度（IC50）分别为18.34μg.ml-1、20.44μg.ml-1。线粒体自噬示踪分析发现，CNE-1细胞摄取大黄素后出现溶酶体增殖，并出现包含线粒体碎片的自噬特征，且增加的趋势与大黄素的摄取量呈正相关。结论:1.成功建立HPLC检测细胞内大黄素的方法，经验证符合药物分析要求。2.大黄素主要以被动扩散方式进入细胞，并伴随有能量参与的其他转运途径，大黄素主要分布在胞浆、消除较快并达到平衡，改变细胞微环境有助于提高药物靶向性。3.与HPLC相比，CLSM能实时动态检测活细胞摄取大黄素的全过程、细胞内分布及细胞形态学变化。4.大黄素导致鼻咽癌CNE-1细胞活性氧水平增加、线粒体自噬。