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细胞色素P450（cytochrome P-450,CYP）是一种混合功能氧化酶,可催化体内多种反应,CYP酶参与体内75%～80%的药物代谢,清除临床上所用65%～70%的药物。奥美拉唑（Omeprazole,OPZ）是一种新型、高效、低毒的抗消化性溃疡药。研究表明,在人体内奥美拉唑主要经CYP系统代谢,生成10余种代谢产物。在大鼠体内,奥美拉唑主要经过CYP1A1、CYP3A2和CYP2D1代谢,生成5-羟基奥美拉唑。本研究选择奥美拉唑作为参照,考查双黄连注射液对大鼠CYP酶的影响。双黄连注射液主要成分为金银花、黄芩、连翘,为纯中药复方制剂,质控成分为黄芩苷,主要用于外感风热引起的发热、咳嗽及多种上呼吸道感染病症,已成为中医药治疗呼吸道感染性疾病的首选药物之一。本课题主要研究双黄连注射液及其质控成分黄芩苷对CYP的影响,预测双黄连注射液与其他药物联用时可能产生的代谢性药物相互作用,为临床合理用药提供参考。材料和方法:1.动物分组和给药方案大鼠随机分成2组（双黄连注射液给药组与对照组）,每组各9只,每天分别尾静脉注射给予双黄连注射液10.42mL·kg-1和同等剂量生理盐水,连续给药7天。2.肝微粒体制备及蛋白质含量测定双黄连注射液给药组和对照组大鼠在末次给药后,禁食24h以上（不限饮水）,分别断头处死,立即取出肝脏,用钙沉淀法制备肝微粒体,Bradford法测定微粒体蛋白浓度。3.肝微粒体体外温孵系统肝微粒体体外温孵系统的组成为:肝微粒体,NADPH,OPZ,磷酸盐缓冲液（pH7.4）。温孵系统总体积为200μL。肝微粒体蛋白浓度为0.2mg·mL-1,NADPH的终浓度为1mmol·L-1,OPZ的终浓度为4μmol·L-1,用0.1mol·L-1磷酸盐缓冲液（pH7.4）定容至终体积。37℃水浴中预孵5min后加入NADPH开始反应。4.样品处理及色谱条件孵育20min后,加入200μl冰冷的乙腈,涡旋30s终止反应。12000rpm离心10min,取30μl上清液进样分析。色谱条件:色谱柱5μm DiamonsiL C18柱（4.6mm×200mm）;流动相:甲醇:乙腈:0.1mol·L-1乙酸铵溶液=10:35:55（v:v:v）;柱温:25℃;流速:1.0mL·min-1;检测波长:302nm。5.双黄连注射液对大鼠肝微粒体CYP的体外影响实验将不同体积双黄连注射液加入到空白肝微粒体温孵系统中,经肝微粒体温孵系统反应及样品处理后,取30μl注入高效液相色谱仪进样分析。以OPZ的转化程度（Turnover,TR）作为酶活性的指标,评价体外实验中双黄连注射液对大鼠CYP活性的影响。6.黄芩苷对大鼠肝微粒体CYP的体外影响实验将不同浓度黄芩苷加入到空白肝微粒体温孵系统中,经系统反应及样品处理后,取30μl注入高效液相色谱仪进样分析。评估黄芩苷对CYP的影响,考察双黄连注射液对CYP的影响与其质控成分黄芩苷的关系。7.双黄连注射液对大鼠肝微粒体CYP的体内影响实验HPLC法分别测定对照组和双黄连注射液给药组大鼠肝微粒体温孵系统中OPZ的浓度,采用独立样本t检验分析两组酶活性的差异,P＜0.05作为检验标准,评估体内实验中双黄连注射液对CYP的影响。结果1.双黄连注射液对大鼠肝微粒体CYP的体外影响实验将双黄连注射液加入到空白肝微粒体温孵系统中,浓度分别为0、0.5、1、1.5、2、2.5、3.0μl·100μl-1时,TR值分别为:477.07±14.13、324.15±13.68、258.74±12.96、201.32±21.60、100.89±4.68、84.84±10.13、68.67±21.76pmol·minl-1·mg-1。结果表明,CYP的活性随双黄连注射液的浓度的升高而降低。IC50为0.96μl·100μl-1。2.黄芩苷对大鼠肝微粒体CYP体外影响实验将黄芩苷加入到空白肝微粒体温孵系统中,浓度分别为0、6、10、15、20、25、30、35mg·mL-1时,CYP的TR值分别为:419.47±27.52、298.89±9.20、279.55±16.09、211.21±10.91、163.31±63.54、115.71±19.56、102.29±22.24、21.81±3.50pmol·min-1·mg-1。结果表明,CYP的活性随黄芩苷的浓度的升高而降低。IC50为12.89μg·100μl-1。3.双黄连注射液对大鼠肝微粒体CYP的体内影响实验用HPLC法测定对照组和给药组大鼠肝微粒体温孵系统中OPZ的含量。对照组和给药组大鼠TR值分别是298.96±13.63 pmol·min-1·mg-1和204.73±23.62 pmol·min-1·mg-1（（?）±s）。经独立样本t检验,给药组大鼠酶活性显著低于对照组（P＜0.05）,表明双黄连注射液对CYP有抑制作用。结论1.体外实验中,双黄连注射液及其质控成分黄芩苷对CYP均有抑制作用。2.体内实验中,双黄连注射液对CYP也有抑制作用。