树莓果实ASA合成代谢酶活性研究及叶片再生体系探索

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:bad_47
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植物中维生素C(简称ASA),不仅为不能合成AsA的少数动物(包括人类)提供丰富的维生素C源,也是衡量果实营养品质的重要指标。树莓含有丰富的维生素C,为研究树莓果实ASA中合成代谢酶基因在AsA积累中的调控作用,本实验以四个树莓品种为试材,分别测定了费尔杜德、哈瑞太慈、撒米特、杜拉明四种树莓果实不同时期的维生素C含量及其合成代谢相关酶的活性。并用费尔杜德和哈瑞太慈两个品种的叶片进行再生体系的建立,探讨了不同种类的生长素和细胞分裂素、暗培养对费尔杜德和哈瑞太慈树莓叶片再生体系建立的影响,为利用基因工程的手段对树莓维生素C合成代谢酶基因在树莓叶片再生体系中的遗传转化,提高果实中的ASA含量方面提供理论基础。试验结果如下:1)对四个品种的树莓果实五个时期的维生素C含量以及合成代谢相关酶活性进行了测定与研究,试验结果显示,四个品种果实AsA含量的积累随着果实的成熟而逐渐上升,在发育的不同时期费尔杜德果实中的ASA含量显著高于其它三个品种。GalLDH活性与AsA含量变化趋势基本一致,通过相关性分析,四个品种中GalLDH活性与ASA积累之间均呈极显著的正相关关系。四个品种的DHAR活性和ASA含量变化趋势一致,在红熟期的费尔杜德和哈瑞太慈果实的DHAR活性与ASA含量呈极显著正相关;品种杜拉明和撒米特果实的DHAR活性与ASA含量呈显著正相关。AsA含量与MDHAR、AAO和APX活性无显著相关性,而DHA含量与APX活性显著正相关。这说明不同树莓品种AsA含量存在较大差异的原因与其GalLDH和DHAR活性存在密切相关,MDHAR、AAO和APX活性不是影响AsA含量的主要因素。2)本实验对两种树莓品种费尔杜德和哈瑞太慈的叶片诱导愈伤组织。试验中的诱导愈伤组织培养基中加入蔗糖为30mg/L,琼脂7mg/L,PH4.9-5.2。发现费尔杜德叶片诱导愈伤组织的最适培养基为 MS+6-BA0.4mg/L+2,4-D 0.8mg/L 和 MS+6-BA0.5mg/L+NAA 0.8mg/L,诱导率均达到100%,当细胞分裂素为TDZ时,培养基为MS+1.5mg/LTDZ+0.2mg/LIAA时,诱导效果相对较好,可达到57.69%。3)对哈瑞太慈叶片进行愈伤组织的诱导,试验中诱导愈伤组织的最适培养基为MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L,诱导率达到92%,愈伤组织生长较快。添加TDZ时,没有从叶片中诱导出愈伤组织。4)从两个品种的愈伤组织中诱导芽,试验表明费尔杜德叶片愈伤组织在MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L 上诱导率较高,不定芽诱导率为 22.72%,MS+TDZ 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L上的不定芽诱导率为15%。哈瑞太慈叶片愈伤组织在MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L上不定芽诱导率为15%。在MS+TDZ 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L上的诱导率为10%。5)对两个树莓品种诱导愈伤组织的培养基暗培养7-12d后,在置于光下常规培养,试验发现相对不进行暗培养的培养基中愈伤组织的形成量增加,并且愈伤组织的形成速度也加快。
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