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研究背景肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是临床上常见的恶性肿瘤之一,已成为全球第六大常见和第二大致死率的恶性肿瘤,其在我国则为第三大常见的恶性肿瘤,严重威胁我国人民的生命健康。尽管现阶段肝癌手术切除率已明显提高,但以5年生存率衡量,肝细胞癌的整体治疗水平仍无显著改善。究其原因,主要在于肝细胞癌术后的高复发转移率。显然,抑制肝癌的侵袭转移能力以降低肝癌术后的高复发转移率是目前肝癌治疗面临的重点和关键问题。经过几十年的研究,现已发现nm23,KAI-1,OPN等一批在HCC侵袭转移中发挥重要作用的因子。我们前期的研究也已发现Egfl7可通过Egfl7/EGFR/FAK信号通路促进HCC的侵袭转移能力。Egfl8(epidermal growth factor-like domain 8,表皮生长因子样结构域8)是Egfl7的同源基因,两者均为Egfl基因家族成员。Egfl8基因编码蛋白与Egfl7编码基因蛋白具有极为相似的蛋白质结构,两者均是分泌型蛋白,都包含有一个EGF样结构域,一个钙离子结合型EGF样结构域和N尾端的信号肽。因此我们认为两者蛋白质结构上的一致性强烈提示Egfl8可能和Egfl7一样在人类恶性肿瘤的发生发展中发挥作用。近年来我们已证实Egfl8在人结直肠癌及胃癌组织中的表达明显下调,且其低表达与结直肠癌及胃癌的远处转移、TNM分期及不良预后密切相关。但Egfl8在HCC组织中的表达水平及其功能目前尚未见研究报道。目的分析Egfl8在HCC组织、肝癌细胞系中的表达水平及其与HCC临床病理特征的相关性,并进而研究Egfl8在肝癌细胞的增殖、凋亡、侵袭及运动能力等方面的作用。方法收集34例手术切除的新鲜肝癌标本及其对应的癌旁正常肝脏组织标本,采用实时荧光定量PCR方法检测Egfl8基因在这些组织标本、正常肝细胞系及3肿肝癌细胞系中的表达水平,并分析Egfl8基因表达水平与HCC各项临床病理特征之间的相关性。进而,我们采用慢病毒介导的基因转导技术,构建Egfl8过表达的HCCLM3肝癌细胞,以Western blot法检测Egfl8蛋白表达水平的变化,并分别采用MTT法、Annexin V-APC染色法、Transwell侵袭小室法及划痕实验观察该细胞在增殖、凋亡、侵袭及运动能力等方面的变化。结果实时荧光定量PCR结果显示,Egfl8基因在67.6%(23/34)的肝癌组织中表现为低表达,且Egfl8在癌组织中的表达高于癌旁组织(0.008±0.02比0.194±0.05,P=0.04)。同时,Egfl8表达下调与肝癌的静脉侵犯(P=0.01)及TNM分期(P=0.00)密切相关。此外,Egfl8在肝癌细胞系中的表达水平也明显低于正常肝细胞系(P<0.05),且其在高侵袭转移潜能肝癌细胞系中的表达低于低侵袭转移潜能的肝癌细胞系(P<0.05)。慢病毒介导的基因转导技术成功构建了Egfl8过表达的HCCLM3肝癌细胞,过表达组细胞中Egfl8蛋白的表达水平较对照组明显上升(0.853比0.254,P<0.001)。与对照组细胞相比,Egfl8过表达组肝癌细胞的凋亡率明显上升(10.05±0.26%比7.28±0.31%,P<0.001),细胞侵袭能力(Transwell小室转移率:1.815±0.019比3.732±0.061,P<0.001)和迁移能力均明显降低(24h迁移率:0.03±0.00比0.17±0.04,P=0.021;72h迁移率:0.23±0.03比0.36±0.05,P=0.028),提示过表达Egfl8基因可抑制肝癌细胞的侵袭转移。而MTT法描绘的增殖曲线则显示,Egfl8过表达组HCCLM3细胞的增殖无显著变化,提示Egfl8基因对肝癌细胞的增殖无明显影响。结论Egfl8在HCC组织及肝癌细胞系中表达下调,其表达下调与肝癌的恶性程度及侵袭转移潜能密切相关。Egfl8的过表达促进了肝癌细胞的凋亡,抑制了肝癌细胞的侵袭及迁移能力,而对其增殖能力无明显影响,提示Egfl8可作为一种反映HCC恶性程度的分子标志物及一个潜在的HCC治疗靶点。