目的 目前应用的抗癌药物普通存在的问题是体内分布广，对肿瘤组织的选择性差，因此会由于药物对健康组织的较高毒性而导致药物较低的治疗指数。为了提高抗癌药的疗效和降低其毒副作用，研制具有缓释、控释、靶向性能的药物制剂，是医药领域中一个极富挑战性和具有实际应用价值的研究热点。随着研究水平的不断深入以及纳米技术对药学研究领域的不断渗透和影响，将纳米技术用于肿瘤的药物治疗，采用具有一定特异性靶向释药系统作为载体，将抗肿瘤药物或其他具有细胞毒性的药物选择性地运送到肿瘤靶组织。纳米技术的应用使药物克服了传统药物许多缺陷以及无法解决的问题，自身存在着许多优越性。纳米粒(Nanoparticles，NP)为固态胶体颗粒，大小在10-1000nm之间，药物可包埋或溶解在纳米粒的内部，也可吸附或偶合在其表面。纳米粒能从肿瘤的有隙漏的内皮组织血管中逸出而滞留在肿瘤内，肿瘤的血管壁对纳米粒有生物粘附性。纳米粒有选择地在肿瘤部位蓄积后，可改变药物在体内的组织分布和摄入，使药物具有一定的被动靶向性，从而提高了药物的疗效和生物利用度；同时纳米粒还可使药物在较长的时间内缓慢释放，使血液中的游离药物降低，减少给药次数，进而降低药物的毒副反应；近几年的研究表明纳米粒载体还能低毒、高效地逆转多药耐药。因此载药纳米粒可以增加药物吸收度、建立新的药物控释系统、改善药物的输送、降低药物的毒副反应及逆转多药耐药等，可为生产安全、合理、有效的理想药物提供强有力的技术保证。纳米粒作为新型的靶向治疗载体，正在抗肿瘤研究中发挥其巨大而独特的作用。 卡莫氟{Carmofur，1-(Hexylcarbamoyl)-5-Fluorouacil，HCFU}为第三代5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil，5-Fu)衍生物，具有抗瘤谱广，脂溶性高，非肝脏代谢依赖性；与5-Fu和替加氟无交叉耐药性；骨髓抑制、胃肠不适等副作用轻微等特点，基于纳米粒这一新型载体的优势和卡莫氟这一新药的特点，本研究采用溶剂乳化法将卡莫氟制备成固脂纳米粒（Sold iPidnanoParticles，SLN厂比较并考察了载药纳米粒与游离卡莫氟的体外抗癌活性以及卡莫氟固脂纳米粒（HCFU－SLN）对 CCL－187／HCFU细胞的逆转作用，为生产安全、合理、有效的抗癌药物制剂和抗肿瘤靶向治疗的研究提供新思路。 方 法 二．HCFU－SLN的制备及体外释药 1．IHCFU—SLN艺过程的优化 采用均匀设计法优化各种工艺条件，确定HCgu量A磷脂量、三硬脂酸甘油酯浓度、Plurnic F68浓度、超声时间为考察因素，每个因素设定五个水平，按方法要求进行实验。 l．2．HCFU－SLN的包封率、载药量及 Zeta电位的测定 取样品溶液适量，置透析袋内透析至电导率低于 50 p后，用电泳法测定Zeta电位。 采用Senhadex G－50柱层析法分离、纯化纳米粒。应用反相高效液相色谱法测定 HCFU药物浓度。色谱往：Spherisorb Wate。（ODS，250mm x 4．6，5卜）；流动相＊．05M磷酸盐－甲醇（3o：7o）；流速：1＊血而n；检测波长：265 urn；进样量为：20 gi。计算包封率和载药量。 1．3 HCFU－SLN体外释药 体外释药采用透析法进行。取适量样品于透析袋中，置于装有适量磷酸盐缓冲液的量瓶中，恒温振荡，在不同的时间吸取释放液，用高效液相色谱法对HCFU－SLN在体外试验中释出的HCFU的含量进行测定，计算累积释药百分率。 工HCFU－SLN的体外抗癌活性 2．1细胞培养 CCL刁87、Hela细胞，以含10％新生牛血清的RPMI 1640培养液培养（内含mo m／rnl青霉素，n用p牙血链霉素L置于37℃，5％CO。培养箱内，2或3天更换培养液并传代，取对数生长期细胞进行实验。 ．t． 2．2 HCFU—SLN及HCFU抗癌活性比较 采用 MTh比色法进行细胞毒实验。取一定浓度的单细胞悬液，分别接种于不同96孔培养板，培养24 h后，进行实验。实验组为：不同浓度的游离HC）’U处理组和相同浓度HCFU－SLN处理组，同时设立平行空白对照组，于37℃孵育。分别在加药后不同时间进行Mh测定，计算细胞存活率。 3．HCF’U－SLN逆转CCL刁／HCFU细胞多药耐药的作用 采用间歇诱导耐药的方法，初步诱导耐药的CCL叫 细胞。 取对数生长期的 CCL－187和 CCL－187／HC刑细胞分别接种于 9 于培养板中，实验组中分别加人不同浓度的HCFU－SLN和HCFU，并加设平行空白对照组，同条件培养72 h后人Th法测定细胞对药物敏感性的变化，计算细胞抑制率及耐药倍数。 RT－PCR检测细胞中mdr刁和MRP的mRNA的表达，引物为mdr－l：5”一 AAGCTfAGTACCAAAGAGGTCTG，3”一 GGCTAGAAACAATAGTGAAAACAA；MRP：5”一 TGACA…CCTCTI’CGATGAT，3”一 G’ITGTGGTGCCTGCTGATGT。 PCR反应条件：94℃二分钟，二个循环；94℃30秒，55℃30秒，72℃且分30秒，35个循环；最后72t 5分钟延伸。扩增后的产物经PAGE电泳检测。 结 ?