SSR标记在河北省林木良种鉴定中的应用及部分板栗品种指纹图谱构建

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在林木育种工作中,由于林木繁殖方式的多样化以及各地品种间的频繁交流,林木品种同物异名或同名异物现象非常普遍,不利于林木品种的培育、管理和推广。为规范林木品种管理,促进林木良种的审定和新品种保护,急需建立经济、便捷、高效、准确的林木品种鉴定标准。随着林木基因库的缩减及近亲品种的涌现,常规的形态学鉴定法、物理化学鉴定法和生化鉴定法在林木品种鉴定中分辨率不高、准确性差的问题越来越突出。而分子标记在基因组层面对品种进行鉴别,保证了鉴定的高度准确性,成为林木品种鉴定的强有力工具。因此,为规范河北省林木良种鉴定标准,本研究利用简单序列重复(Simple Sequence Repeats,简称SSR)技术,建立了9个树种SSR鉴定技术体系,对2016年河北省拟审定良种进行了SSR指纹分析和鉴定。同时,收集了51个板栗栽培品种,利用SSR技术构建SSR指纹图谱。主要研究结果如下:1.建立起9个树种SSR分子标记技术体系,利用筛选出的121对引物,对9个树种31个拟审定良种进行鉴定。其中杂交鉴定19个,选育鉴定9个,芽变鉴定3个。以31个拟审定良种及58个对照样品为材料,共计89个样品。分别以3种不同鉴定类型(苹果拟审定样品冀苹3号疑似父本鉴定、海棠选育样品红巴伦与相似样品的差异鉴定、梨疑似芽变植株唐贵妃继代与原株的鉴定)为代表进行具体分析,探索出SSR对不同类型良种的应用。研究结果表明,SSR分子标记法结果稳定可靠,准确率较高,尤其适用于杂交品种的亲本鉴定和选育品种间的差异鉴定。由于检测SSR位点少,且不能检测单个碱基的突变,对芽变品种难以鉴别出差异,需要配合芽变性状才能明确鉴定。2.利用SSR分子标记技术构建51个板栗优良品种的指纹图谱和SSR指纹数据二维码。经过筛选的8对SSR引物对51个板栗品种进行分析,扩增出33个位点,其中100%为多态位点,平均每条引物4.13个位点,扩增位点数目在2~9之间,多态性信息含量(PIC)值变幅为0.286~0.690,平均为0.473。将毛细管电泳扩增出的DNA条带进行UPGMA法0-1聚类分析,得出遗传距离在0.069~0.520之间,在遗传距离0.447处被分成3类,不能按照所属产区分类。8对引物的组合将51个板栗品种一一区分开,表明SSR位点的等位基因数目多,可有效揭示板栗的遗传多样性。构建51个板栗品种的图谱代码,并与8对SSR引物扩增信息一并录入SSR指纹数据二维码中,为板栗的新品种鉴定和种质资源研究提供依据。
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