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基因组DNA文库(genomicDNAlibrary)是含有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体。这个文库中将含有基因组内全部基因片段,它像一个贮存有基因组全部序列的信息库,故称为基因组文库。
我们从特定大鼠的肝脏细胞中提取基因组DNA,选择合适的限制性内切酶(Sau3AI)进行部分酶切使之成为一定大小的片段,应用蔗糖密度梯度离心法分离大小在9-23kb之间的片段。将此回收的大小合适的外源DNA片段与载体DNA(λ噬菌体载体,λGEM-11)进行连接,经体外包装,转染细菌,得到一组含有不同DNA片段的重组噬菌体颗粒。通过倒平板测定包装的噬菌体滴度,计算出噬菌斑形成率>106pfu/ug,说明所建立的基因组文库是完整的。挑取数个噬菌斑,提取重组λ噬菌体DNA,酶切检查插入片段的大小,其插入片段在9-23kb之间。同时用高倍数感染法大规模制备λ噬菌体,提取基因组文库DNA,通过PCR方法检查基因组文库的完整性,通过琼脂糖凝胶电泳知PCR扩增产物与预期大小一致。