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目的：1.考察九龙藤总黄酮的提取纯化工艺2.研究九龙藤总黄酮对H2O2诱发心肌细胞凋亡的作用机制3.研究九龙藤总黄酮对心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的作用方法：1.九龙藤总黄酮的提取纯化工艺考察1.1九龙藤总黄酮鉴别：以浓氨水反应、三氯化铝反应、浓流酸反应、盐酸-镁粉反应、氢硼化钾反应、硅胶薄层色谱法进行定性。1.2九龙藤总黄酮含量测定：以黄芩苷为对照品，在波长278.5nm处测定九龙藤提取物甲醇溶液吸光度，代入黄芩苷标准曲线方程得到供试品溶液中总黄酮的浓度，按下公式计算九龙藤总黄酮与黄芩苷对照品对照所得的总黄酮含量：总黄酮含量（%）＝待测液中总黄酮的浓度×待测液体积/待测粗提物重量×100%总黄酮提取率（%）＝总黄酮含量×提取物重量（g）/生药量（g）×100%1.3九龙藤总黄酮的提取：在前期研究的基础上，以95%乙醇冷浸，并按萃取液极性大小梯度萃取制总黄酮粗品。1.4九龙藤总黄酮的纯化方法优化：以静态吸附率和解吸率为考察指标，确定大孔树脂型号；以总黄酮纯度及回收率为指标，对九龙藤总黄酮的纯化工艺进行优选。2.九龙藤总黄酮抗心肌过氧化损伤作用建立H2O2诱导乳鼠心肌细胞过氧化损伤模型与乳鼠心肌细胞H/R损伤模型，阳性药物组分别以维生素C(Vit.C，终浓度100mg·L-1)、舒血宁(SXN，终浓度为100mg·L-1)预处理，九龙藤黄酮组以不同剂量BCF(终浓度分别50、100、200mg·L-1)预处理。用MTT法检测细胞活力；Annex v-FITC/PI双染法测定心肌细胞凋亡率；ELISA法测定细胞培养上清液肿瘤坏死因子（TNF-α）、总抗氧化活力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、一氧化氮合酶（NOS）、还原型谷胱甘肽（GSH）含量（活性）；免疫组化方法观察Bcl-2、Bax、NF-κβp65蛋白的表达。结果：1.优化九龙藤总黄酮纯化工艺条件确定以D101型大孔树脂对九龙藤黄酮的吸附性能及解析效果较好；最佳纯化工艺为：15.5mg·mL-1、pH3-4上样液，上样量小于16.85mg·g-1（黄酮/湿树脂）；上样速度0.125BV·h-1，柱子径高比1：6，４BV60%乙醇以1BV·h-1洗脱。总黄酮平均纯度48.95%（以黄芩苷为对照），回收率96.09%。总黄酮提取率为：2.6％（以生药计）。2.九龙藤总黄酮抗心肌细胞氧化损伤作用2.1九龙藤总黄酮对H2O2诱发心肌细胞凋亡的作用：与模型组相比，不同剂量九龙藤黄酮预处理均可增加心肌细胞活力、减少心肌细胞凋亡率、降低TNF-α、MDA、LDH，提高T-AOC、T-SOD、GSH，上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达（P<0.01或P<0.05）。2.2九龙藤总黄酮对心肌H/R损伤的作用：心肌细胞形态上，光镜下见乳鼠心肌细胞原代培养3～5天后，心肌细胞融合成片，呈放射状，细胞间由多个伪足交织成网状，呈同步化搏动；H/R模型组心肌细胞胞浆空泡形成，细胞伪足减少，折光率下降，并有大量心肌细胞脱落、悬浮、溶解坏死，搏动幅度及频率降低，节律不齐；九龙藤总黄酮各组可见部分的心肌细胞伪足回缩，细胞脱落悬浮现象，损伤程度较模型组显著减轻，死亡细胞减少；与模型组相比，不同剂量九龙藤黄酮预处理均不同程度的增加细胞活力，减少心肌细胞凋亡率、降低TNF-α、iNOS，维持eNOS水平，上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax、NF-κβ蛋白表达（P<0.01或P<0.05）。结论：1.从九龙藤茎中提取总黄酮化合物，以D101大孔吸附树脂纯化九龙藤总黄酮具有较好效果。正交设计优选所得工艺稳定可行，可用于九龙藤总黄酮的纯化。2.九龙藤总黄酮对H2O2及H/R诱导心肌细胞过氧化损伤具保护作用，其机制可能抗氧化应激损伤、升高GSH、T-SOD，清除自由基；减少MDA，抑制脂质过氧化；降低LDH，改善心肌代谢；降低iNOS、增加eNOS，减轻心肌损伤；上调Bcl-2、下调Bax、NF-κβ蛋白表达、降低TNF-α含量，抑制心肌细胞凋亡。