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目的本研究中通过建立大鼠肾缺血再灌注模型、肾小管上皮细胞缺血再灌注模型,分析miR-125表达变化后对急性肾损伤后大鼠肾功能的保护作用及其相关机制,旨在明确miR-125b在急性肾损伤中的作用机理,为临床上急性肾损伤的治疗提供新的方向。方法(1)将Wistar大鼠随机分为3组,每组10只,分别为:control组:对照组,大鼠正常饲养,未经任何处理;sham组:假手术组;I/R组:建立肾缺血再灌注大鼠模型,需每日注射含1%羟甲基纤维素的生理盐水溶液,大鼠双侧缺血45min后,复灌注24h。观察各组大鼠一般状态,分析肾功能变化情况。采集各组大鼠血液样本,检测血清尿素氮和血肌酐水平。采集各组大鼠的肾组织样本,检测其中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)和丙二醛(Malonaldehyde,MDA)的含量。HE染色法制作肾组织病理学切片,观察各组大鼠肾组织病理学变化。采用TUNEL法检测各组肾组织细胞凋亡情况。(2)HK-2细胞以含10%胎牛血清的DMEM培养液在37℃、5%CO2饱和度条件下传代培养,在同步24h后,将其随机分为4组。control组:对照组,正常培养,未经任何处理;I/R组:将细胞密封5小时,并在细胞培养皿中耗尽氧气后将细胞解密,以模拟体内细胞缺血-再灌注损伤状态。然后在孵育箱中放置24小时;miR-125b mimic组:将细胞密封5小时,并在细胞培养皿中耗尽氧气后将细胞解密,以模拟体内缺血再灌注损伤状态。然后加入100nM浓度的miR-125b mimic,在孵育箱中放置24小时;miR-125b inhibitor组:将细胞密封5小时,并在细胞培养皿中耗尽氧气后将细胞解密,以模拟体内缺血再灌注损伤状态。然后加入200nM浓度的miR-125b inhibitor,在孵育箱中放置24小时。每组重复至少三次以上。(3)将Wistar大鼠随机分为4组,每组10只,分别为:sham组:假手术组;1/R组:建立大鼠肾缺血再灌注模型;miR-125b mimic组:建立大鼠缺血再灌注模型,经腹腔注射miR-125b mimic;miR-125b inhibitor组:建立大鼠缺血再灌注模型,经腹腔注射mi R-125binhibitor。各组大鼠按照分组要求进行处理,于缺血再灌注6h后检测大鼠肾功能。采集各组大鼠肾组织,检测其中miR-125b、JAK、STAT3 mRNA表达和p-JAK、p-STAT3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果(1)各组大鼠均未出现死亡。与control组相比,sham组大鼠毛色和饮食均无明显变化,但睡眠略少,活动也略显迟钝,这可能与手术影响有关;I/R组大鼠食欲较control组明显下降,进食、饮水均减少,精神萎靡,活动较少且行动迟缓。与control组相比,sham组血清中尿素氮和肌酐水平均无明显变化(P>0.05);与control组相比,I/R组大鼠血清中尿素氮和肌酐水平明显增高(P<0.01)。与control组相比,sham组大鼠肾组织中SOD和MDA水平均无明显变化(P>0.05);与control组相比,I/R组大鼠肾组织中SOD水平显著降低(P<0.01),MDA水平则明显增高(P<0.01)。control组和sham组大鼠肾组织结构与肾小球细胞形态均未发生异常;I/R组大鼠肾组织中肾小球体积增大,可观察到系膜增生,间质区内有大量炎性细胞浸润,肾小球细胞呈空泡变性。与control组相比,sham组肾组织细胞凋亡率无明显变化(P>0.05);与control组相比,I/R组大鼠肾组织细胞凋亡率明显增高(P<0.01)。(2)结果显示:与control组相比,I/R组的HK-2细胞活性明显减低(P<0.01);与I/R组相比,miR-125b mimic组HK-2细胞的活性明显升高(P<0.01),而miR-125b inhibitor组细胞的活性则显著下降(P<0.05)。与control组相比,I/R组HK-2细胞中 p-JAK、p-STAT3、Bax 以及Caspase-3 蛋白的表达水平明显增高(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达水平则明显降低(P<0.05);与I/R组相比,miR-125b mimic组HK-2细胞中p-JAK、p-STAT3、Bax和Caspase-3蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达水平则明显增高(P<0.05);与I/R组相比,miR-125b inhibitor组HK-2细胞中p-JAK、p-STAT3、Bax和Caspase-3蛋白的表达水平显著增高(P<0.05),而Bcl-2蛋白的表达水平则明显降低(P<0.05)。与control组相比,I/R组HK-2细胞的凋亡率明显升高(P<0.05),与I/R组相比较,miR-125b mimic组细胞的凋亡率明显降低(P<0.05),与I/R组相比较,miR-125binhibitor组凋亡率明显升高(P<0.05)。(3)与sham组相比,I/R组大鼠血清中尿素氮和肌酐水平均明显增高(P<0.05);与I/R组相比,miR-125b mimic组大鼠血清中尿素氮和肌酐水平均明显降低(P<0.05),而miR-125b inhibitor组大鼠血清中的尿素氮和肌酐水平则显著上升(P<0.05)。与sham组相比,I/R组大鼠肾组织中miR-125b的表达水平明显降低(P<0.05),JAK、STAT3 mRNA的表达水平显著增高(P<0.05);与I/R组相比,miR-125b mimic组大鼠肾组织中miR-125b的表达水平明显增高(P<0.05),JAK和STAT3 mRNA的表达水平明显降低(P<0.05);而miR-125b inhibitor则较I/R组显著降低(P<0.05),JAK和STAT3 mRNA的表达水平则显著上升(P<0.05)。与sham组相比,I/R组大鼠肾组织中p-JAK、p-STAT3、Bax蛋白的表达水平明显增高(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达水平则明显降低(P<0.05);与I/R组相比,miR-125b mimic组大鼠肾组织中p-JAK、p-STAT3、Bax蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达水平则明显增高(P<0.05);与I/R组相比,miR-125b inhibitor组大鼠肾组织中p-JAK、p-STAT3、Bax蛋白的表达水平显著增高(P<0.05),而Bcl-2蛋白的表达水平则明显降低(P<0.05)。结论miR-125b能够有效保护因缺血再灌注引发的肾功能损害,其机制可能与miR-125b抑制JAK/STAT3信号通路,抑制促凋亡蛋白Bax及凋亡蛋白Caspase-3的表达,促进凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达有关。