【摘 要】
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研究表明,DEHP暴露会引起DNA损伤,还可能干扰细胞周期。长期低剂量暴露于环境内分泌干扰物的混合物(包含DEHP)可引起miRNA的表达失调,以及小鼠睾丸内雌二醇含量的减少。DEHP能够通过氧化应激诱导神经毒性,但是否存在其他分子机制仍待进一步研究。miR-7a是生物体细胞、组织和器官的正常发育过程中不可或缺的一部分。miR-7a能够通过调节靶基因cdc42影响小鼠神经干细胞迁移和增殖,从而抑制
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研究表明,DEHP暴露会引起DNA损伤,还可能干扰细胞周期。长期低剂量暴露于环境内分泌干扰物的混合物(包含DEHP)可引起miRNA的表达失调,以及小鼠睾丸内雌二醇含量的减少。DEHP能够通过氧化应激诱导神经毒性,但是否存在其他分子机制仍待进一步研究。miR-7a是生物体细胞、组织和器官的正常发育过程中不可或缺的一部分。miR-7a能够通过调节靶基因cdc42影响小鼠神经干细胞迁移和增殖,从而抑制周围神经损伤修复。因此,miR-7a可能参与DEHP诱导的神经毒性。本实验运用生物信息学的手段,将PARP1作为miR-7a的靶基因筛选出来。并探究DEHP是否通过调控miR-7及其靶基因PARP1影响斑马鱼胚胎的正常发育。本实验构建了pGL3-PARP1-WT、pGL3-PARP1-MUT、eGFP-PARP1-WT和eGFP-PARP1-MUT四种重组质粒。通过双荧光素报告基因法和双荧光蛋白报告基因法发现miR-7a与PARP1 3’-UTR存在相互作用的位点。当向斑马鱼ZF4细胞转染miR-7a mimic时,PARP1在m RNA水平表达显著降低;当转染miR-7a inhibitor时,PARP1的表达量显著升高,这间接验证了miR-7a对PARP1具有调控作用。在DEHP急性毒性实验中,当DEHP浓度为50,100,200 mg/L时,斑马鱼ZF4细胞的活性显著降低;当DEHP浓度为400 mg/L时,斑马鱼ZF4细胞的活性降低为空白组的67.61%。然而,无论是miR-7a过表达(mimic)或者是miR-7a受抑制(inhibitor),均对DEHP作用下斑马鱼ZF4细胞的增殖无显著影响。此外,低浓度的DEHP暴露也会对斑马鱼胚胎早期发育造成影响,从而降低存活率。不同浓度DEHP处理的斑马鱼胚胎中miR-7a表达量与DEHP的浓度之间呈显著正相关;PARP1表达量与DEHP的浓度之间呈显著负相关;miR-7a表达量与PARP1表达量之间无显著相关性。邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)是一种邻苯二甲酸酯类化合物,具有较强的亲脂性和疏水性,主要作为增塑剂被广泛使用。MicroRNA(miRNA)是一类长度约为20-24个核苷酸的生物内源性非编码单链小分子RNA,广泛参与生物体转录和转录后水平的基因调控。DEHP能够通过调节miR-7a的表达量影响斑马鱼胚胎的生长发育,但miR-7a参与调节靶基因PARP1的分子机制有待进一步确定。
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