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神经炎症是神经退行性疾病重要的病理特征，主要涉及中枢神经系统（central nervous system,CNS）胶质细胞激活后炎症因子的释放，引发炎症级联放大效应。目前关于神经炎症的研究主要集中在小胶质细胞，而星形胶质细胞（astrocyte,AS）作为CNS中主要的免疫细胞，与脑中其他组织细胞紧密接触，在神经免疫系统中处于关键地位。多项研究显示盐酸右美托咪定（dexmedetomidine,DEX）降低内毒素血症模型、缺血再灌注损伤等的前炎症细胞因子（如IL-6、TGF-β等）的水平，且与α7烟碱型乙酰胆碱受体（alpha7nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR）激活密切相关。但是DEX对星形胶质细胞神经炎症模型晚期炎症因子高迁移率族蛋白1（high mobility group box1,HMGB1）的表达是否有影响尚未可知。 目的: 观察DEX预处理对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）刺激后AS细胞HMGB1表达的影响，并初步探讨该影响与α7nAChR的关系。 方法: 1.SD大鼠大脑皮层AS的分离、培养、纯化和鉴定。 （1）AS的分离和培养。取SPF(specific pathogen free)级、出生24h内的Sprague-Dawley(SD)大鼠，在无菌条件下获取大脑皮层组织。解剖显微镜下完整剥离脑膜和血管。采用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA溶液37℃消化15min后获得单细胞，重悬于完全培养基（DMEM（Dulbeccos modified Eagles medium）+10%胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）），于细胞培养箱（37℃、5%CO2、90%相对湿度）进行培养，每隔2～3天换液（具体换液时间由细胞生长速度决定）。细胞长满瓶底90%左右时采用胰酶消化法消化传代。 （2）AS的纯化。获得的单细胞悬液差速贴壁30min以除去成纤维细胞；每代细胞融合度达到90%左右时使用气浴恒温摇床震荡法（37℃、170rpm过夜）去除小胶质细胞和少突胶质细胞。 （3）AS纯度鉴定。对第二代细胞采用针对AS的特异性标志物胶质纤维酸性蛋白（Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP）进行免疫组织化学荧光染色，用以鉴定AS的纯度。 2.DEX预处理对AS HMGB1基因和蛋白表达的影响。 将AS随机分为空白对照组、LPS组、DEX预处理组、α-银环蛇神经毒素（α-bungarotoxin,α-BGT,是α7nAChR特异性阻断剂）组和α-BGT预处理组。LPS组细胞使用LPS（终浓度为1μg/mL）孵育12h；DEX预处理组细胞加入DEX注射液（终浓度为1μmol/L）孵育30min后，使用移液器吸弃培养基，PBS洗涤两次后，加入新鲜完全培养基，再加入LPS（终浓度为1μg/mL）作用12h；α-BGT组预先向培养体系中加入α-BGT（终浓度10nmol/L），30min后加入LPS（终浓度为1μmol/L）孵育12h；α-BGT预处理组的AS用α-BGT（终浓度10nmol/L）孵育30min，加入1μmol/L DEX孵育30min，细胞换液后用1μg/mL的LPS孵育12h。采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测LPS和（或）DEX对细胞活力的影响；荧光定量PCR（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）技术检测细胞HMGB1在mRNA水平上的表达情况，蛋白质免疫印迹（Western Blot,WB）检测各组细胞HMGB1蛋白的表达。 结果: 1.大鼠皮层AS的纯度鉴定结果。免疫荧光化学染色结果表明第二代AS纯度达到95%以上。 2.DEX预处理对LPS激活后AS细胞HMGB1基因和蛋白表达的影响。 （1）MTT法检测细胞的相对活力。结果显示，暴露于DEX（1μmol/L）和不同浓度LPS（0.1、1、10μg/mL）24h，MTT比色法测定结果显示1μmol/L的DEX和各浓度LPS对AS活力没有影响（P＞0.05）。 （2）RT-PCR结果显示：1μg/mL和10μg/mL的LPS处理6h，都能够诱导AS分泌HMGB1。使用1μg/mL LPS孵育AS，发现细胞分泌水平在12h达到峰值。与空白对照组相比较，使用1μg/mL LPS刺激后，细胞hmgb1mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）；与LPS组比较，DEX预处理30min后hmgb1mRNA的表达明显降低（P＜0.05）；加入10nmol/L（终浓度）α-BGT后30min再用DEX预处理，结果显示与DEX预处理组相比，α-BGT预处理组hmgb1mRNA明显上调（P＜0.05）；α-BGT预处理组与LPS组相比，hmgb1mRNA表达水平无显著差异（P＞0.05）。 （3）Western Blot检测结果示:与正常对照组相比，LPS组HMGB1蛋白表达水平明显增高（P＜0.05）；相较于LPS组，DEX预处理组细胞HMGB1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）；α-BGT预处理组HMGB1蛋白相较于DEX预处理组升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论: DEX预处理通过激活α7nAChR抑制星形胶质细胞神经炎症模型HMGB1表达是其抗炎作用机制之一。