目的:抑制蛋白酶体的活性已经成为治疗包括多发性骨髓瘤（MM）在内的多种恶性肿瘤的有效策略。目前已有三个小分子蛋白酶体抑制剂上市,但与其相关的剂量限制性毒性及耐药性的出现表明仍需开发新一代的药物以满足临床需求。在本课题组的前期工作中,设计并合成了新型蛋白酶体抑制剂Y219,本研究旨在通过体外和体内模型研究Y219在MM中的治疗功效及作用机制。方法:体外研究中通过特异性的荧光肽底物测定Y219对纯化人20S蛋白酶体及免疫蛋白酶体中活性位点的抑制作用;通过Proteasome-Glo法评估Y219对MM细胞内蛋白酶体活性的影响;采用CCK-8法检测Y219对人MM细胞系和实体瘤细胞系增殖活力的影响;以Cell-Titer法考察Y219对分离自MM患者骨髓中CD138+细胞和健康志愿者的外周血单核细胞（PBMC）的细胞毒性。体内研究通过Proteasome-Glo法比较了硼替佐米和Y219在小鼠体内的蛋白酶体活性抑制及药效学（PD）特征;使用MM异种移植瘤、PDX及SCID-rab小鼠模型检测Y219体内的抗MM活性。机制研究中采用流式细胞术分析了Y219对MM细胞周期阻滞和凋亡的影响;通过Western-Blot、qRT-PCR及荧光素酶测定分析Y219对NF-κB信号传导的影响。结果:体外实验表明,Y219有效结合并选择性抑制组成型蛋白酶体和免疫蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶样（CT-L）活性位点,对非蛋白酶体没有显著抑制作用;与硼替佐米相比,Y219对细胞内20S蛋白酶体的CT-L蛋白水解位点更具特异性和持续性抑制作用,并以剂量和时间依赖性方式抑制多种肿瘤细胞及原代MM细胞的增殖活性,对来自健康个体的PBMC毒性较小。体内研究发现,无论是静脉或口服给予Y219,都具有比硼替佐米更强且更持久的药效;在3种小鼠移植瘤模型中观察到Y219具有良好的耐受性和抗肿瘤活性,即使在骨髓微环境（BM）存在下也能发挥显著的抗MM活性。机制研究表明,Y219可以导致泛素化底物的积累,并且以剂量和时间依赖性方式诱导MM的G2/M期阻滞及促进细胞凋亡。Western-Blot结果进一步证明这一现象与p53、p21和p27表达水平升高以及Y219触发Caspase级联反应和诱导ER应激相关蛋白的活化有关。最后研究发现,Y219抑制了NF-κB的转录激活及其下游效应因子如细胞因子（IL-6,TNF-α）及细胞粘附分子（ICAM）的产生。结论:鉴于体外和体内的研究,我们发现了可口服的新型蛋白酶体抑制剂Y219,对MM具有良好的选择性及体内外抗肿瘤活性,有望成为下一代抗多发性骨髓瘤新药。