第一部分创伤性脑损伤后铁稳态调控相关因子的表达改变目的:研究创伤性脑损伤(Trauamatic brain injury,TBI)后铁稳态调控因子铁调素与膜铁转运蛋白表达变化的时程。方法:1.实验动物模型建立及分组:选择成年ICR小鼠,采用改良的Feeney法建立TBI模型,随机分为假手术组(Sham)与TBI组,TBI组中按照TBI处理后检测时间分为3h、12h、24h、3d、5d、7d组。2.Western blot检测:按照不同时间点,取实验动物伤灶附近脑组织,检测铁调素(hepcidin)、膜铁转运蛋白(Ferroportin,FPN)及转铁蛋白受体(Transferrin receptor,TFR)1表达水平。结果:相对于Sham组,TBI后FPN随时间增长其表达水平逐渐下降,5d时到达最低谷,7d时浓度又开始上升;铁调素在5d内浓度逐渐上升,7d时浓度下降;TFR1在TBI后3h时浓度上升,然后随时间增长逐渐下降。结论:TBI后铁调素表达增加,FPN表达水平下降,TFR1早期升高后降低。第二部分HY-13066A干预铁稳态调控因子对创伤性脑损伤后神经元损伤的影响目的:探讨对铁稳态调控因子铁调素及FPN相互作用进行干预后神经元损伤的影响。方法:1.实验动物模型建立及分组:选择成年ICR小鼠,采用改良的Feeney法建立TBI模型,随机分为假手术组(Sham)、TBI组和TBI+给药组。2.药物处理:HY-113066A溶于生理盐水,TBI后1h腹腔注射给药。3.Western blot检测:取实验动物伤灶附近脑组织,检测铁调素、FPN与TFR1表达水平。4.免疫荧光:检测FPN表达与定位情况。5.尼氏染色:各组实验动物脑组织制作的石蜡切片,检测神经元损伤情况。结果:1.相对于TBI组,给药组的TFR1表达显著增加,FPN表达增加,而铁调素表达下降。2.HY-113066A处理后24h,通过荧光双标膜铁转运蛋白和Neu N发现TBI组中FPN阳性神经元数量少于Sham组,而HY-113066A处理后,FPN阳性神经元数量增加。3.TBI组中损伤的神经元数量较Sham组和TBI+HY组增加。结论:通过HY-113066A阻断FPN与铁调素相互作用后,TBI模型中脑内FPN表达水平增高,TFR1也增高,说明胞内铁转运向胞外,神经细胞损伤减轻。