骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes,MDS）是一组起源于造血干细胞的异质克隆性疾病病症,它的病变基本原因可能是由于造血干细胞和祖细胞发生了异常生长发育的情况,并且会引起骨髓造血能力的降低以及骨髓正常基本功能的衰退,并有很大风险使得病症发展的情况得到进一步的恶化。其表现不仅仅体现在骨髓细胞发育的形态改变异常情况上,同时会引发骨髓中的髓系造血细胞数量的大量增加以及促使外周血中的的血细胞总数量大幅度降低,继而有很高的概率会使病症向急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）更进一步的演变。这一演变过程是由信号转导过程中的多种细胞因子、部分肿瘤抑制基因的潜在丢失以及机体的免疫机制等复杂内环境所介导的过程。全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）是一种用于治疗恶性血液系统疾病的药物,它在临床上已经被证明对急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia,APL）等一系列恶性血液病有效,但由于它具有严重的维甲酸综合征以及耐药性,肝肾毒性等问题,使得在当前的临床治疗药物的选择上,ATRA应用的疾病范围受到了一定的限制。因此本课题组通过药物化学筛选合成方法,将ATRA作为初始化合物进行结构修改设计,在此基础上得到了具有各种基团的多种维甲酸衍生化合物。在这一系列衍生物中,4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR）被发现其类似效应,并在接下来的药理实验过程中被发现了,ATPR可在体外诱发多种肿瘤细胞向正常细胞分化并且可以在很大程度上抑制肿瘤细胞的发育周期和增殖过程,在这里我们需要进一步探究的是ATPR对于骨髓增生异常综合征的作用的具体机制。为了更多地研究ATPR对于诱导MDS细胞分化的可能机制以及RNA依赖性解旋酶DDX23在ATPR诱导分化过程中的作用,本研究选用了SKM-1细胞株进行实验,通过蛋白质组学分析基因差异表达,体外实验观察在ATPR对于ATP依赖性的RNA解旋酶DDX23表达的影响以及DDX23在ATPR诱导SKM-1细胞分化的过程中所发挥的作用。本课题的研究内容可分为以下3个部分。1. ATPR对SKM-1细胞的分化及周期影响分别通过采用在浓度不同(0、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9 M)的条件下和差异时间点（24、48、72h）作用下的ATPR对SKM-1细胞进行处理,然后使用CCK-8法检测SKM-1细胞增殖活性变化,确定ATPR对SKM-1细胞的最佳作用条件。之后分别用western blot分析分化蛋白P27,PU.1在不同条件下的表达变化;给予ATPR(10^-6 M)作用于SKM-1细胞72h后,使用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果提示:ATPR可以在体外增加SKM-1细胞中分化蛋白的表达,其中药物在作用浓度为10^-6 M,作用时间为72h时效果较为显著;同时流式结果表明ATPR可以阻滞SKM-1细胞于G1期。2. 蛋白质组学分析ATPR作用于SKM-1细胞的结果给予ATPR(10^-6 M)作用于SKM-1细胞72h后收集细胞,通过蛋白质组学非标机定量技术（Label-Free）,通过对比MS图谱,再整合到相应蛋白,实现对蛋白质在不同样本中的相对达水平的定量分析,最后分析出ATPR作用与SKM-1细胞后的蛋白表达差异情况并进行验证。结果提示:共筛选出差异大于1.2倍的上调蛋白212个以及差异小于5/6倍的下调蛋白18个,经验证结果属实,其中以ATP依赖性的RNA解旋酶DDX23在ATPR作用于SKM-1细胞时所产生的影响最大。3. DDX23在ATPR诱导SKM-1细胞分化过程中的作用将过表达质粒GV146-DDX23转染进入SKM-1细胞中,再使用ATPR(10^-6 M)对转染后的SKM-1细胞进行刺激,使用western blot技术对于细胞中DDX23、P27、PU.1、PCNA、CDK4和CDK2蛋白表达量进行检测;使用瑞姬氏染色检测细胞的形态学变化;使用流式细胞仪检测细胞表面单核系分化抗原CD14的表达变化。结果显示:过表达DDX23可以进一步促进ATPR作用后所引起的SKM-1细胞中CDK2、CDK4和PCNA的表达量下降,而PU.1和p27的蛋白表达量变化则是相反。同时过表达DDX23也可以进一步增强ATPR诱导的SKM-1细胞向成熟细胞分化的形态学改变以及SKM-1细胞表面单核系分化抗原CD14的表达。为了进一步证实DDX23的作用,我们通过使用si RNA-DDX23沉默SKM-1细胞中DDX23的表达,再使用western blot技术对于细胞中DDX23、P27、PU.1、PCNA、CDK4和CDK2蛋白表达量进行检测;使用瑞姬氏染色检测细胞的形态学变化;使用流式细胞仪检测细胞表面单核系分化抗原CD14的表达变化。结果显示:沉默DDX23可以使SKM-1细胞中p27、PU.1的表达量下降,同时略增了CDK2、CDK4和PCNA的表达。并且沉默DDX23会拮抗ATPR诱导的SKM-1细胞形态向成熟方向分化以及下调SKM-1细胞中表面单核系分化抗原CD14的表达。