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目的 血卟啉单甲醚（Hematoporphyrin monomethyl ether，HMME）是我国自行研制的单体卟啉类光敏剂。目前对以HMME为光敏剂的光动力治疗（HMME-PDT）诱导靶细胞死亡的机制还不了解。本研究以HeLa细胞为靶细胞，从HMME-PDT诱导HeLa细胞死亡及HeLa细胞抵御死亡两个方面，对HMME-PDT诱导靶细胞死亡的机制进行初步的研究。 方法和结果 （1）不同活性氧成分在HMME-PDT诱导靶细胞死亡中的作用：用Hochst33342等染色荧光显微镜观察PDT后细胞形态学变化，用MTT法及AnnexinV和PI双染流式细胞仪检测法分别检测细胞的存活率及凋亡率和坏死率。荧光显微镜观察结果显示：在HMME-PDT后24h，HeLa细胞可出现细胞核固缩或碎裂，有凋亡小体形成。MTT结果显示：单线态氧特异性的淬灭剂叠氮钠（SA）或羟自由基特异性的淬灭剂D-甘露醇（DM）均可抑制HMME-PDT导致的细胞死亡（以往研究表明单线态氧和羟自由基分别是Ⅱ型和Ⅰ型光动力反应的产物）。在PDT后6h的AnnexinV-PI双染流式细胞仪检测结果显示：SA以减少细胞坏死为主，而DM以减少细胞凋亡为主。（2）线粒体、内质网在HMME-PDT诱导靶细胞凋亡中的作用：用Fura-2／AM负载荧光分光光度计检测细胞质的游离钙浓度([Ca2+]i)，细胞总蛋白中SERCA2和细胞质中（去线粒体）细胞色素C（CytoC）的含量变化用Western杂交法检测，用特异性底物剪切荧光分光光度计法检测半胱天冬酶-3（CAP-3）活性，细胞的存活率及凋亡率和坏死率分别用MTT法及AnnexinV和PI双染流式细胞仪检测法检测。结果显示：在PDT后即刻就有[Ca2+]i的增高，且照光剂量越大[Ca2+]i增高越明显，SA或DM均可抑制军医进修学院博士学位论文HM加[E一DT诱导HeLa细胞死亡机制的初步研究[Caz+]i的增高;在PDT后60min内，照光剂量越大，sERc弋蛋白含量下降也越明显;SA或DM也均可抑制SERCAZ蛋白含量的下降.在PDT后，存在细胞质CytoC含量和C妙一3活性增加，用SA、DM或膜通透性钙离子鳌合物B妙毛叼AM均可抑制它们的增加。用BAP毛叼AM拮抗[C扩勺i的升高，PDT后HeLa细胞的存活率增加、凋亡率和坏死率均下降。（3）靶细胞抵御HMME一PDT诱导死亡的机制:在PDT后0.5、2、6和12h，HeLa细胞中总的或磷酸化的ERKI/2或p38MA卫K含量用Western杂交法检刚，用MTT法和内mexinV一PI双染流式细胞仪检浏法检测细胞的存活率及凋亡率和坏死率。结果显示:在PDT后各时间点，磷酸化ERKI/2的含量均比对照组高，最高可达对照组的10倍左右（在PDT后Zh）;而磷酸化P3 SMApK的含量只在PDT后2和6h增加，但最高可达对照组的110倍左右（也在 PDT后2h）。用ERKI/2特异性的抑制剂PD98059或p38MApK特异性的抑制齐dSB203580，可使PDT后细胞的存活率下降、凋亡率和坏死率均增加。结论HMME一PDT在HeLa细胞内可同时发生I型和n型光动力反应，n型光动力反应产物单线态氧导致细胞坏死为主，I型光动力反应产物乡自由基以导致细胞凋亡为主。HMME一PDT可使HeLa细胞的内质网膜上sERCAZ降解和线粒体内CytoC转位于细胞质。HM侧田一PDT也可使[Ca2+1i升高，〔caZ+]i的升高促进HeLa细胞发生凋亡和坏死，从而增加HeLa细胞的死亡。HeLa细胞也可通过活化ERKI/2和p38MApK，来抵御HMME一PDT诱导的死亡。