【摘 要】
:
背景巨噬细胞是一种可塑性非常高的细胞,能够通过一个被定义为极化的过程迅速改变其功能。除此之外,巨噬细胞的极化还涉及代谢的重新编程,如糖脂代谢等。B细胞淋巴瘤因子3(B-cell CLL/lymphoma 3,BCL3)最初发现于慢性B淋巴细胞白血病。现今对BCL3功能的研究大多针对于其对炎症的影响,我们前期的研究发现HFD饲养的肥胖小鼠脂肪组织中bcl3 mRNA表达量明显高于正常小鼠。提示我们B
论文部分内容阅读
背景巨噬细胞是一种可塑性非常高的细胞,能够通过一个被定义为极化的过程迅速改变其功能。除此之外,巨噬细胞的极化还涉及代谢的重新编程,如糖脂代谢等。B细胞淋巴瘤因子3(B-cell CLL/lymphoma 3,BCL3)最初发现于慢性B淋巴细胞白血病。现今对BCL3功能的研究大多针对于其对炎症的影响,我们前期的研究发现HFD饲养的肥胖小鼠脂肪组织中bcl3 mRNA表达量明显高于正常小鼠。提示我们Bcl3基因的表达和机体的脂代谢应该存在联系,然而,BCL3是否参与了巨噬细胞糖代谢和极化的调控过程尚不清楚。因此,通过研究BCL3在巨噬细胞内的作用,为巨噬细胞极化及代谢相关疾病的预防和治疗提供新的见解。目的通过研究bcl3-ko小鼠巨噬细胞中糖代谢以及细胞极化的改变,探讨BCL3在巨噬细胞代谢重编程及极化中所起的作用。方法1.动物模型的建立:将CRISPR/Cas9技术构建的bcl3-ko小鼠(梁银明教授馈赠)与对照组WT小鼠给予正常饮食饲养。2.检测bcl3敲除对巨噬细胞极化的影响:(1)小鼠骨髓巨噬细胞的提取:取小鼠两条后肢,将骨髓冲出,随后使用专用培养基将其诱导七天至成熟状态。(2)M1与M2型巨噬细胞的诱导:分别使用LPS,IFN-γ,IL-4诱导BMDM24h。(3)相关指标的检测:通过qRT-PCR检测M1与M2型巨噬细胞表面标记物以及分泌的炎症因子水平。3.检测bcl3敲除对巨噬细胞糖代谢的影响:(1)通过qRT-PCR检测巨噬细胞糖代谢过程中发挥重要作用的关键酶的RNA表达水平。(2)根据Western blot实验监测巨噬细胞糖代谢过程中起着关键作用的的限速酶的蛋白表达水平。(3)通过seahorse实验检测巨噬细胞外酸化率(ECAR)(4)在RAW264.7巨噬细胞系中过表达bcl3,然后再通过Western blot检测巨噬细胞糖代谢过程中发挥重要作用的关键酶的蛋白表达水平。4.检测bcl3敲除后对巨噬细胞糖代谢的影响是否与NF-κB通路的激活有关:(1)通过Western blot以及免疫荧光实验(Confocal)检测与NF-κB通路的激活有关的P65蛋白的表达水平。(2)通过luciferase实验检测BCL3对NF-κB通路的调控作用。(3)使用NF-κB通路的抑制剂TAK-242处理巨噬细胞,再根据Western blot实验监测巨噬细胞糖代谢过程中起着关键作用的的限速酶的蛋白表达水平。5.探究BCL3影响巨噬细胞极化与糖代谢之间的关系:用糖酵解抑制剂2-DG处理巨噬细胞后再通过qRT-PCR以及流式细胞分析术检测BCL3对巨噬细胞极化的影响。6.研究bcl3敲除对巨噬细胞的功能的影响:(1)通过细胞划痕以及transwell实验,检测bcl3敲除对巨噬细胞迁移的影响。(2)通过CCK8实验确定bcl3敲除对巨噬细胞增殖的影响。(3)通过流式细胞分析术检测BCL3对巨噬细胞吞噬功能的影响。结果1.qRT-PCR结果显示bcl3敲除的巨噬细胞中M1型巨噬细胞标记物(IL-6、IL-1、MCP-1、CPR132、iNOS)mRNA表达水平均上调,而M2巨噬细胞标记物(Arg1、CD206)的mRNA表达水平无变化。我们得出结论,相比于正常组的小鼠巨噬细胞bcl3敲除的巨噬细胞向M1型极化能力更强,而向M2型极化的能力没有差异。2.Western blot,Seahorse以及qRT-PCR结果显示bcl3敲除的巨噬细胞中糖酵解相关限速酶的表达水平上调,ECAR水平升高,并且在bcl3过表达到巨噬细胞系后糖酵解能力明显减弱,这说明BCL3能够抑制巨噬细胞的糖酵解能力。3.双荧光素酶报告基因,免疫荧光共聚焦以及Western blot结果显示巨噬细胞中bcl3的敲除能够促进P65的磷酸化以及P65的入核,最终促进了NF-κB通路的激活。4.通过流式分析以及免疫共沉淀实验发现BCL3与一氧化氮合酶(iNOS)之间存在强烈的相互作用,并且能够抑制一氧化氮合酶的表达。5.qRT-PCR和Western blot实验显示加入糖酵解抑制剂2-DG后,正常组巨噬细胞与bcl3敲除的巨噬细胞的M1型相关标记物的表达水平相似,即向M1型极化的能力没有差异,说明BCL3能够通过控制糖酵解来调节巨噬细胞的极化功能。6.划痕实验,Trans-well实验提示bcl3敲除后巨噬细胞的迁移能力增强,CCK8实验提示bcl3敲除后巨噬细胞的增殖能力增强。结论本研究认为BCL3能够通过抑制NF-κB通路的激活从而抑制巨噬细胞的糖酵解能力,最终导致巨噬细胞向M1型极化的能力下降。
其他文献
目的2019年底爆发的新型冠状病毒仍在快速传播,防控难度之大前所未有。实体医院诊疗模式不仅效率低而且增加了就医者与医务人员之间交叉感染的风险。因此,如何提升互联网医院服务质量,促进其快速健康的发展是当下亟需解决的问题。本文结合SERVQUAL模型相关概念并借鉴其服务项目内容,构建了互联网医院服务质量评价指标体系,以济南市某互联网医院为研究对象,找出当下互联网医院服务质量优化路径并提出策略,研究结果
背景脑小血管病(cerebral small vessel disease,CSVD)影像学征象主要包括脑白质高信号(white matter hyperintensity,WMH)、脑微出血和血管周围间隙等。其中WMH在核磁共振上表现为脑白质区T1序列上的信号强度为等信号或低信号,在T2加权和FLAIR序列上的信号强度为高信号。排尿障碍是脑小血管病常见但易被忽略的临床特征,主要表现为尿频、尿急、
CO2驱油技术是低渗油藏提高原油采收率的一种重要技术手段,吉林油田部分区块由于储层温度高、原油中甲烷、重质组分含量高的影响,使得CO2-原油混相压力高,只能实现非混相或近混相驱替,导致最终驱油效率低。为降低两者的最小混相压力,提高CO2与原油混相程度,开展降低混相压力研究。通过对降低最小混相压力方法的机理分析和系统总结,选择以形成反胶束、微乳液作为适合目标区块的降低最小混相压力研究方向。要形成此结
选取300家上市公司,借助DEA-BCC模型和Malmquist指数对其技术创新能力和影响因素进行评价分析。结果表明,2020年农业上市公司整体技术创新效率水平较低,且外资企业的综合效率(35.2%)、纯技术效率(55.2%)以及年降幅情况都稍大于民营企业和国有企业。2018—2020年农业上市公司Malmquist指数整体下降了28.37%,大部分企业处于价值链的中低端,技术效率水平有所下降,且
油井产能预测是提升油田经济效益和维持油田正常生产开发的重要内容之一。油田现场数据具有数据量庞大、数据种类繁多、包含许多缺失数据和异常数据等特点,处理困难,而基于数据挖掘的各项数据处理方法、数据建模算法可以高效准确的从海量数据中提取特征数据,实现数据降维,进而建立油井产能预测模型,是进行油井产能预测研究的一种新方法。本文研究以H152区长3油藏为例,全面收集该油田现场数据,筛选出影响油井产能包含地质
背景循环中的初始T细胞处于静息状态,代谢需求较低。当初始T细胞在T细胞受体(T cell receptor,TCR)介导的抗原识别和共刺激信号,如CD28,共同作用下,T细胞被活化,其增强的合成代谢用于细胞增殖和功能发挥。m TOR(Mammalian T arget of Rapamycin,m TOR)为CD28下游信号节点,其被激活能促进合成代谢基因表达,满足细胞增殖中间产物合成需求。而AM
以探索致密-低渗油藏孔喉中异于常规油藏的润湿现象为背景,开展Si O2微管中气-液和液-液接触角的实验,研究流体接触角与管径的关系及其影响因素。借助高倍光学显微镜,并利用Axio Vision软件,测量了内径为5~1800μm二氧化硅微管中的气-液、液-液接触角。将实测的流体在Si O2微管中和平面上接触角进行对比发现,在内径足够小的微管中的气-液和液-液接触角均与其在平板上接触角有明显的差异。在
背景Ⅰ型糖尿病(T1D)雄性生殖功能异常,是由自身免疫系统紊乱、胰岛素分泌绝对不足及其高血糖症等所诱发的,上述症状通过调控氧化应激、内分泌、性腺轴以及内皮细胞等引起血管、神经、睾丸组织等慢性进行性损害,从而导致了雄性生殖功能异常,主要临床表现为勃起功能障碍、性腺功能减退、活动精子数减少及青春期延迟。近年来,随着干细胞研究的快速发展,干细胞已被证明在改善糖尿病雄性生殖障碍方面取得了较好的效果。本研究
背景急性 CO 中毒后迟发性脑病(delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning,DEACMP)是急性 CO 中毒(acute carbon monoxide poisoning,ACMP)患者经过(2~60d)假愈期后出现的一系列神经精神症状。其发病机制复杂,多与组织缺血缺氧、氧化应激损伤、免疫炎症级联反应相关。研究发现R
孤东18-7区块位于孤东四区南部,属于层状构造断块油藏,具有多套油水系统。经过30多年的开发,油田经过了产能建设、高产稳产的阶段。目前孤东18-7区块已经进入低速稳产阶段,面临“高含水、原油稠、注不进、采不出”的突出问题。减氧空气驱具有增大油藏压力、减低稠油粘度的优势,并且减氧空气本身也具有“易获取、易制备、易注入”等优势。本论文针对该区块低产难产问题,以孤东18-7区块为研究对象,进行了减氧空气