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研究背景和目的：山奈酚(Kaempferol，Kae)是天然总黄酮中的一个有效活性成分，属于植物性雌激素，广泛存在于中草药和一些可食性植物中。山奈酚具有显著的神经保护作用。山奈酚可抑制β-淀粉样肽(β-amyotrophicpeptide，βA)引起的半胱氨酸天冬酶(Caspase)的激活及细胞色素C的释放、削弱βA引起的中央活性氧细胞(reactiveoxygenspecies，ROS)的聚积。除此之外，山奈酚具有对抗βA引起的成神经细胞瘤细胞株(humanneuroblastomacell)和嗜铬细胞瘤(phenochromocytomacells，PC12)的损伤、抗幽门螺杆菌、清除体内自由基、增强机体免疫力、激动雌激素受体、抑制单胺氧化酶(monoamineoxidaseinhibiter,MAOIs)等作用。最近研究发现山奈酚能够对抗N-甲基-D-天冬氨酸(N-Methyl-D-Aspartic，NMDA)引起大鼠培养的皮层神经元的损伤。神经元膜电压依赖性钾离子通道在大鼠海马CA1锥体神经元的迟发性死亡中起着重要的作用。脑缺血缺氧时，膜电压依赖性钾通道开放，细胞内K+外流增加，胞内K+减少，Ca2+内流增多，进而诱导神经元迟发性程序性死亡。某些电压依赖性钾通道阻断剂可以通过抑制电压依赖性钾通道的激活，减少细胞内Ca2+内流，从而对受损神经元起到保护作用。我们推测，山奈酚对神经元的保护作用除可对抗βA引起的神经毒性之外，也可能与通过其对电压依赖性钾通道的影响发挥作用。本实验采用全细胞膜片钳技术，研究山奈酚对正常和缺氧时大鼠海马CA1区锥体神经元膜电压依赖性钾通道的影响。
方法：①急性分离海马CA1神经元：2～8天Sprague-Dawley(SD)大鼠断头取脑，分离出海马区域，置于含ProteaseXⅢ孵育液中进行消化，6～8分钟后将脑组织取出，手工切成约400μm的脑片，然后在含胰酶抑制剂(trypsininhibitor)和牛血清白蛋白(bovineserumalbumin，BAS)的孵育液中孵育1～2小时，然后在显微镜下分离出海马CAi区神经元。②急性短暂性模拟缺氧：用含有60μmol.L-1氰化钾(potassiumcyanide，KCN)的细胞外液灌流海马CA1神经元模拟缺氧。③全细胞记录：采用EPC-9(HEKA，Germany)膜片钳放大器进行全细胞膜片钳记录。钳制电压为-50my，记录电流时的滤波频率2kHz，采集频率为10～40kHz，信号采集与储存采用pClamp6.02软件，数据分析采用Origin6.0软件进行分析。
结果：①山奈酚可抑制电压依赖性钾通道，对正常和缺氧时电压依赖性钾通道均有抑制作用。当去极化到+60mV时，对IA和IK抑制率分别为77.3±7.1％和40.5±10.0％。②山奈酚对IA和IK的抑制具有浓度依赖性，对IA和IK的IC50分别为53.96±6.67μmol.L-1和81.52士9.33μmol.L-1。③山奈酚对IA和IK的抑制具有可逆性，用标准外液洗脱后，电流恢复到原来的电流。④山奈酚对IA和IK的抑制具有电压依赖性，去极化电压从-70mV到+60mV时，山奈酚明显降低IK和IA的I/V曲线，即减小IK和IA，并且在不同膜电位下减小的程度不同。
结论：①山奈酚对正常和缺氧时大鼠海马CA1区锥体神经元电压依赖性钾通道有阻断作用，能同时降低IA和IK。②其对钾通道的抑制作用可能参与脑缺血缺氧保护。