吸血过程对全沟硬蜱基因表达及其微生物群落的影响

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全沟硬蜱(Ixodes persulcatus)是中国东北地区优势蜱种,同时也是蜱媒疾病主要传播媒介。作为一种专性吸血的外寄生虫,血餐摄取不仅对其生活史的完成至关重要,同时也影响着病原菌和微生物群落的增殖与传播。目前,对于全沟硬蜱血餐过程中生理生化和微生物群落变化的研究匮乏,对其携带的病原菌致病机制更是知之甚少。本论文针对以上问题进行探索性研究,并得到以下结论:(1)利用I1lumina测序技术获得全沟硬蜱参考转录组(含有56900条unigene),并首次发现全沟硬蜱可能是利什曼原虫(Leishmania)载体;(2)分别比较了全沟硬蜱不同吸血阶段表达谱,发现其吸血过程中基因表达显著改变,其中未吸血和半饱蜱虫之间差异表达的unigene有12332条,半饱和饱血蜱虫之间差异表达的unigene有3261条。经GO富集分析发现差异表达基因在与血液摄取、营养代谢、呼吸、激素合成、卵发育、免疫反应、活性氧解毒、转录翻译相关的生理过程中显著富集;(3)深入分析了全沟硬蜱代谢解毒酶系和抗氧化酶系,发现这些超基因家族出现物种特异性扩增,且在应对血餐摄取和消化过程中激增的外源物质和氧压时发挥重要作用;(4)利用16S rRNA V4区Illumina测序全面分析了全沟硬蜱吸血前后微生物群落的变化以及蜱虫叮咬后大鼠血样中微生物群落组成。分别在未吸血蜱虫、饱血蜱虫、大鼠血样中检测出了373、289、441个菌属的细菌,其中237个菌属是该三个样本共有的,推测这些细菌可能是吸血过程中经由蜱虫传播给宿主的潜在致病菌;(5)以蜱传莱姆病螺旋体(Borrelia burgdorferi B31A3)为模型,初步分析了病原菌在血餐过程中感染哺乳动物的致病机制。通过基因敲除和动物模型实验分析了莱姆病螺旋体的六个编码蛋白(BBA68-BBA73),发现蛋白BBA68、BBA69、BBA71可能是感染哺乳动物必需的致病因子;(6)制备了两种基因型莱姆病螺旋体(B.burgdorferi B31A3和B.garinii NMJW1)全菌抗血清,并利用获得的抗血清成功地对莱姆病螺旋体抗原片和幼蜱中肠病原菌进行了血清学检测;此外还利用免疫印迹法,以两种基因型莱姆病螺旋体(B.burgdorferi B31A3和B.garinii NMJW1)全菌裂解物作为抗原,检测全沟硬蜱叮咬后一个月大鼠血清的抗体反应,并分析了不同基因型全菌抗原检测到的特异条带之间的差异。本论文不仅首次在分子水平分析了全沟硬蜱血餐过程中的基因表达变化,而且为了解宿主-共生菌互作机制以及蜱传疾病的防控提供了部分理论基础。
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