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目的: SD大鼠腹腔内注射阿霉素(ADR)是研究扩张型心肌病心肌重塑的公认动物模型,本研究通过这一经典模型,研究AT1受体阻滞剂氯沙坦对大鼠心肌重塑的影响及其与骨桥蛋白(OPN)表达的关系,从分子水平探讨氯沙坦对心肌纤维化的保护作用机制,为防治心血管疾病心肌重塑的新思路提供一定的实验依据。
方法:将8周龄雄性SD大鼠(体重250±10g)随机分为三组:正常对照组(N组):生理盐水2ml/kg腹腔注射,每周1次,共8周;模型组(M组):盐酸阿霉素2mg/kg腹腔注射,每周1次,共8周;氯沙坦治疗组(L组):盐酸阿霉素2mg/kg腹腔注射,每周1次,共8周,氯沙坦10mg/kg灌胃,于第1次阿霉素应用后次日开始,每日1次,共8周。末次注射ADR后10天,无菌取出心脏。本实验分为四部分:(1)大鼠心肌病理改变的观察。(2)各组SD大鼠心重指数(CWI)、左室指数(LVWI)的测定。(3)免疫组化方法观察大鼠心肌组织的Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原的表达。(4)Western blot方法检测大鼠心肌组织OPN的表达。
结果:
1.光镜下心肌病理改变:正常对照组心肌细胞排列均匀整齐,横纹清楚,细胞大小均一,心肌细胞间隙无变化。模型组心肌细胞肥大、伸长、灶状坏死,肌质变性,核大、深染,间质纤维化、胶原增生,证实阿霉素诱导SD大鼠心肌胶原重塑模型是成功的。氯沙坦组大部分心肌组织呈平行排列,结构清晰,间质有少量疏松结缔组织。L组死亡率低于M组(8.33％vs25.00％)。
2.CWI和LVWI:与正常对照组(2.78±0.02,2.18±0.01)相比,模型组CWI和LVWI(2.86±0.05,2.20±0.02)均升高,差异有统计学意义(P＜0.01)。氯沙坦干预可使CWI和LVWI不同程度下降(2.82±0.05,2.19±0.03),差异有统计学意义(P＜0.01)。但氯沙坦组CWI和LVWI仍高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01)。
3.心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达:模型组(25.44±0.98,20.05±0.40)与正常对照组(8.20±0.47,5.21±0.62)相比,Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原的表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.01)。氯沙坦干预后,Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原的表达均降低(14.68±0.66,11.27±0.44),差异有统计学意义(P＜0.01)。但氯沙坦治疗组与正常对照组比较,Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原的表达仍有升高,差异有统计学意义(P＜0.01)。
4.心肌组织OPN的表达:模型组(1.11±0.09)与正常对照组(0.43±0.01)相比,OPN表达增多,差异有统计学意义(P＜0.01)。氯沙坦干预后,OPN表达降低(0.80±0.11),差异有统计学意义(P＜0.01)。但氯沙坦治疗组与正常对照组比较,OPN的表达仍有升高,差异有统计学意义(P＜0.01)。
结论:
1.在阿霉素诱导的SD大鼠心肌重塑中,骨桥蛋白参与了心肌纤维化的信号转导。
2.氯沙坦可以部分通过抑制骨桥蛋白表达逆转心肌重塑。