目的：TPX2（targeting protein for Xenopus kinesin-like protein2）是近年来研究较热的一种微管相关蛋白，在有丝分裂纺锤体形成过程中发挥重要的作用。研究发现其过表达与多种恶性肿瘤的发生发展有关。本实验旨在探讨TPX2在甲状腺髓样癌组织中的表达情况及其与甲状腺髓样癌患者临床病理因素的相关性，并运用RNA干扰技术，通过特异性的抑制TPX2在甲状腺髓样癌TT细胞中的表达，研究其对甲状腺髓样癌细胞增殖、凋亡以及周期分布的影响，并探讨其可能的作用机制，为以TPX2为靶点的甲状腺髓样癌治疗提供实验依据。方法：1采用免疫组织化学染色法检测32例甲状腺髓样癌组织和8例正常甲状腺组织中TPX2的表达，并分析其与甲状腺髓样癌临床病理因素的联系。2设计并合成4对靶向人TPX2基因的小干扰RNA（TPX2-siRNA-1、TPX2-siRNA-2、TPX2-siRNA-3、TPX2-siRNA-4）致TPX2基因沉默。激光扫描共聚焦显微镜观察转染效率。Real-time PCR检测TPX2mRNA表达水平并筛选出最有效的siRNA。3采用MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布。采用Western blot法检测TPX2、Aurora-A、CyclinB1和野生型P53蛋白（wt-p53）表达水平。4统计学分析：所有数据均经SPSS16.0软件分析，计数资料比较采用χ~2检验；计量资料采用均数±标准差表示，均数间比较采用单因素方差分析。以P<0.05为差异具有统计学意义。结果：1免疫组化结果：TPX2蛋白在甲状腺髓样癌组织中的阳性表达率（62.5%，20/32）显著高于正常甲状腺组织（0%，0/8）(P＜0.05）。并且TPX2在甲状腺髓样癌组织中阳性表达率的高低与患者临床分期、淋巴结转移及肿瘤大小密切相关（P＜0.05）而与性别、年龄及是否存在甲状腺炎症无关（P>0.05）。2转染效率的优化及最佳siRNA筛选：Lipofectamine2000与荧光标记siRNA分别以不同比例搭配时，转染效率不同，以1：2比例搭配时转染效率最高，为（96.23±2.53）%（P＜0.05）。4对TPX2-siRNA转染TT细胞24h后均发挥沉默效应，尤以TPX2-siRNA2沉默效果最佳，TPX2-siRNA2组TPX2mRNA表达量较空白对照组下降（87.7±6.16）%（P＜0.05），而阴性对照组和空白对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。3MTT检测结果：TPX2-siRNA2作用于TT细胞48h后其增殖特性开始受到抑制，至72h抑制作用最为明显，生长抑制率26.7%。4FCM检测细胞凋亡、周期分布结果：转染后72小时，转染组细胞凋亡率较空白对照组显著升高［（14.96±2.69）%vs（2.24±0.62）%］（P＜0.05），而空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义（P＜0.05）。细胞周期分布：转染后72小时，与空白对照及阴性对照组相比，TPX2-siRNA2转染组细胞G2/M期细胞比例上升（P＜0.05），S期细胞比例下降（P＜0.05），转染后发生了G2/M及G1/S双期阻滞。5Western blot结果：转染后72小时western blot结果显示，实验组TPX2蛋白表达量较空白对照组、阴性对照组显著降低（0.124±0.017vs0.407±0.022、0.393±0.020）（P＜0.05），而阴性对照组和空白对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。TPX2-siRNA2转染TT细胞后，与空白对照组相比，Aurora-A和CyclinB1的表达水平明显下调；wt-p53蛋白表达上调（P＜0.05）；空白对照组和阴性对照组间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：1甲状腺髓样癌组织中TPX2蛋白表达的阳性率高于正常甲状腺组织，并且在甲状腺髓样癌组织中TPX2蛋白的阳性率高低与患者临床分期、淋巴结转移及肿瘤大小有关，目前国内外均未见报道。2TPX2的过表达是促进甲状腺髓样癌细胞增殖、抑制凋亡的重要原因之一。3RNAi抑制TPX2表达通过下调Aurora-A、CyclinB1蛋白表达水平，上调wt-P53蛋白表达水平，诱导甲状腺髓样癌细胞发生G2/M、G1/S双期阻滞，有效抑制了甲状腺髓样癌细胞的增殖能力，并诱导其发生细胞凋亡。