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研究背景非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是目前慢性肝脏疾病首要病因,其疾病谱包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪肝炎、以及由其演变的肝硬化甚至肝癌。脂质代谢异常、胰岛素抵抗、线粒体功能紊乱、炎症因子、基因遗传等多种因素参与NAFLD的发生发展,然而其确切发病机制不明。MicroRNAs是真核生物体内一类大小约22nt的非编码小RNA,其成熟体通过与靶基因mRNAs的3’UTR的碱基互补配对结合,参与基因表达的转录后调控。已有研究发现miRNAs参与脂肪细胞分化、肝脏脂肪酸和胆固醇代谢、胰岛素抵抗等过程的调节,提示miRNAs很有可能参与NAFLD发生发展。miR-152是我们前期运用高脂饮食成功诱导大鼠脂肪肝并通过二代测序技术得到的在肝组织中异常高表达的microRNA.已有研究报道miR-152在酒精性脂肪肝中也呈现高表达趋势,提示我们miR-152参与脂肪肝的发病过程。近期有研究指出miR-152能直接抑制经典WNT信号通路。WNT信号通路在肝脏内广泛表达,其调控作用包括了脂质合成代谢、胰岛素抵抗、线粒体功能等过程。那么miR-152的差异表达是否是通过调控WNT信号通路直接参与了脂肪肝的发病过程?目的发现miR-152在肝细胞脂质代谢中的作用；验证WNT是miR-152靶基因并进一步探讨miR-152抑制WNT信号通路促进肝细胞脂肪变性的分子机制。方法首先,利用慢病毒技术,构建miR-152过表达慢病毒和miR-152沉默慢病毒,分别转染人正常肝细胞和人肝癌细胞中,得到miR-152过表达组细胞(Lenti-miR-152)、miR-152沉默组细胞(Lenti-152-In)和空载对照组细胞(Lenti-NC),RT-PCR验证miR-152表达；棕榈酸和油酸(1mM)干预Lenti-miR-152、 Lenti-152-In和Lenti-NC组细胞后,采用油红O染色和甘油三酯测定试剂盒检测脂质合成情况；同时,通过构建荧光素酶报告基因质粒,结合生物信息学分析结果验证miR-152靶基因；对Lenti-miR-152、Lenti-152-In和Lenti-NC分别在mRNA水平和蛋白水平检测WNT信号通路以及下游脂质合成关键转录因子的表达水平,探讨miR-152通过抑制WNT信号通路促进肝细胞脂肪变性的分子机制。最后分别检测Lenti-miR-152、Lenti-152-In和Lenti-NC组细胞ATP含量和线粒体拷贝数,探讨miR-152对线粒体功能的调控作用。结果RT-PCR验证miR-152表达证实成功构建miR-152过表达和miR-152沉默肝细胞。油红O染色结果显示miR-152促进肝细胞脂滴聚积；miR-152过表达组细胞甘油三酯含量高于空载组；miR-152沉默对肝细胞脂肪代谢影响不大。经生物信息学分析发现,Wnt10b是miR-152的靶基因,双荧光素酶报告基因系统结果证实miR-152直接结合于Wnt10b的3’UTR区；同时,Western blot结果显示miR-152能直接抑制Wnt10b的表达。RT-PCR与Western blot显示miR-152增加GSK-3β磷酸化水平,促进P-Catenin降解,抑制P-Catenin进入肝细胞核内,上调脂质合成关键转录因子SREBP-lc和PPARγ的表达。最后,miR-152明显降低肝细胞内ATP含量和线粒体拷贝数。结论miR-152抑制Wnt10b,促进肝细胞发生脂肪变性和线粒体损伤,miR-152可能成为NAFLD防治的潜在的靶标。