论文部分内容阅读
目的针对发病率逐年增高且呈年轻化的卵巢早衰,使用国产玛咖、不同剂量的秘鲁进口玛咖和中药淫羊藿饮片对SD大鼠肾阳虚证卵巢早衰模型进行研究,实验评价玛咖温补肾阳、养护卵巢的作用和机制,探讨玛咖性味归经的趋向,丰富新资源食品玛咖在中医养生本草的理论研究,填补玛咖养护卵巢的实验空白,以期加强关于玛咖的养生产品的研发和玛咖的产业化发展、助力海外本草玛咖在中国的本土化研究,进一步探索养护卵巢、防治卵巢早衰的养生本草。方法1.分组：24只空白对照组(A组)为未注射氢化可的松的雌性SD大鼠。120只造模组大鼠在造模结束后随机分为7组,其中模型对照组(B组)24只、进口秘鲁玛咖低剂量组(C组)16只、进口秘鲁玛咖中剂量组(D组)16只、进口秘鲁玛咖高剂量组16只(E组)、淫羊藿破壁饮片组(F组)16只、国产玛咖粉组(G组)16只、国产玛咖代用茶组(H组)16只。2.造模：以144只8-9周龄SPF级成年性成熟雌性SD大鼠(未孕未产)为研究对象,模型组120只每日上午在后下肢肌注氢化可的松32mg. kg-1, d-1,连续12d,建立。肾阳虚证大鼠卵巢早衰模型。3.灌胃：以上六组分别按对应药品(淫羊藿)或试验用玛咖进行灌胃,进口LMC组、进口MMC组、进口HMC组大鼠分别以2.5g-kg-1-d-1、5gkg-1·-d-1、10kg·kg-1·d-1剂量进行灌胃秘鲁玛咖粉,淫羊藿组大鼠以1g·kg-1·d-1剂量灌胃淫羊藿,国产MC粉组大鼠以2.5g·kg-1·d-1剂量给予灌胃国产玛咖粉,国产MC茶组大鼠以2.5g·kg-1·d-1剂量给予灌胃国产玛咖代用茶,模型组与空白组分别给予灌胃2.5ml·kg-1·d-1体积的纯净水。4.取材：第一阶段取材：造模结束后空白组和模型组中各取8只大鼠进行取材完成第一次取材,取血液、卵巢、子宫、肾脏、肾上腺。在造模结束后分别连续灌胃14天和28天后的次日,每组分别各取材8只,完成第二阶段和第三阶段的取材。5.观察：分别观察各组大鼠体质量、大体外观情况、注射部位情况,每日阴道涂片观察动情周期、取材后计算脏器指数(卵巢、子宫、肾脏、肾上腺),检测血清生殖激素水平：孕激素P、雌二醇E2、睾酮T、卵泡刺激素FSH、黄体生成素LH及FSH/LH比值的变化,光镜评估卵巢组织学状态,特别是卵泡发育(重点计数各级卵泡数),电镜观察评估卵巢卵泡发育状态(重点评估原始卵泡和初级卵泡超微结构)。结果结果中恢复、改善等明显差异的表诉均指有统计学意义(P<0.05)或(P<0.01)：1.体质量：B组在第一、第二、第三阶段低于A组和注射前；2.摄食量：B组第一阶段低于A组；3.大体情况(肾阳虚证外观、动情周期、注射部位溃疡)：在第一阶段、第二阶段B组比A组优；在第一阶段、第二阶段C、D、E、F、G、H各灌胃组比B组优。4.脏器指数：①卵巢指数：B组在第一阶段、第二阶段低于A组和注射前；C、D、F、G、H组高于B组；②子宫指数：各组及各阶段间无明显差异；③肾脏指数：第一、二阶段B组高于A组,在第二阶段C、D、F组低于B组。④肾上腺指数：第一、二阶段明显B组比A组低,二阶段C组、D组、E组、F组比B组高。5.光镜检测卵巢形态：①第一阶段：A组比B组动物卵巢结构完好,卵泡计数未见显著差异。②第二阶段：B组、C组比A组生长卵泡数量显著减少,B组动物卵巢退行性变化,次级生长卵泡、成熟卵泡及黄体数量减少,闭锁卵泡及囊状卵泡数量增多。D组、E组、F组、H组比B组生长卵泡显著增多,H组黄体明显增多。③第三阶段：B组比A组卵巢退行性变化,生长卵泡减少。E组比B组生长卵泡、闭锁卵泡数量明显减少,F组比B组闭锁卵泡明显减少,C组黄体数量比B组显著减少。6.电镜检测卵泡超微结构：①第一阶段：卵母细胞：B组比A组出现较多自噬体现象,卵泡细胞变性或凋亡。②第二阶段：.卵母细胞,B组比A组可见多个自噬体和自噬溶酶体,部分细胞核固缩,核膜不整,有深切迹,偶见凋亡,可见核裂,染色质边聚。D组比B组明显恢复；卵泡细胞：F组、C组比B组明显改善。③三阶段：卵母细胞,B组比A组可见多个自噬体,卵泡细胞部分细胞凋亡。F组、C组、D组比B组恢复。卵泡细胞：F组、C组、D组比B组明显恢复。7.生殖激素：①血清睾酮(T)：在第二阶段H组比B组低。②雌二醇(E2)：在第一阶段、第二阶段B组比A组低,其余四组高于B组；③孕酮(P)：在第三阶段B组比A组低,在第二阶段、第三阶段D、F组比B组高；④促黄体生成素(LH)：第一阶段、二阶段B组比A组高,第二阶段灌胃组均低于B组。⑤血清促卵泡生成素(FSH)和FSH/LH:第一阶段、第二阶段B组比A组高,第二阶段D组、F组比B组低；结论1.肾阳虚证POF造模成功,进口玛咖和国产玛咖均能较好改善SD雌性大鼠肾阳虚证、养护卵巢；在灌胃玛咖二周后有效,灌胃四周后效果更明显。D组与F组疗效接近,C组、G组、H组有效,但略弱于F组和D组,E组无明显效果。2.玛咖改善肾阳虚证养护卵巢机制与玛咖温补肾阳,健脾益气的功效相关,对肾-天癸-冲任-胞宫轴和下丘脑-垂体-卵巢-子宫生殖轴均能起到调节的双轴调节相关。3.玛咖性味归经：辛、甘、微咸,温。归脾、肾经。功效：温补肾阳,健脾益气。