【摘 要】
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HE4(humanepididymisgeneproduct4，又名WFDC2，WAPfour-disulfidecoreprotein2)基因在卵巢癌组织中高表达，但是在正常卵巢组织中低表达。有文献报道了HE4基因产物作为临床诊断卵
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HE4(humanepididymisgeneproduct4，又名WFDC2，WAPfour-disulfidecoreprotein2)基因在卵巢癌组织中高表达，但是在正常卵巢组织中低表达。有文献报道了HE4基因产物作为临床诊断卵巢癌的分子指标的可能性[6]，但该基因启动子的转录调控机制是否与其卵巢癌组织特异性的表达相关至今仍无人深入研究。由此，我们在较详细地研究HE4启动子的结构的基础上，对甲基化状态对HE4启动子的活性影响作机制性的探讨。
为了探讨HE4基因的转录调控机制，我们开展了以下研究：1.用半定量RT-PCR的方法评估HE4基因在肿瘤细胞株中的表达情况；2.以荧光素酶报告基因载体为基础，对HE4基因的上游顺序开展了3’、5’缺失突变和一系列连接体扫描突变；3.通过瞬时转染/体外双荧光素酶报告系统对这些重组质粒中插入片段进行启动子活性的分析；4.针对蛋白和关键顺式区域的结合的特异性和能力，开展泳动滞后和抗体介导的超迁移分析；5.应用免疫沉淀方法检测转录因子之间的结合情况；6.应用甲基化特异性PCR(MethylationSpecificPCR，MSP)方法结合DNA测序分析HE4基因启动子中CpG甲基化的状态；7.利用甲基转移酶在体外将DNA甲基化后通过瞬时转染及启动子/报告基因活性检测以及甲基化后的EMSA等方法分析启动子甲基化对HE4启动子活性和反式作用因子功能的影响。
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