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随着基因工程技术的迅速发展,蛋白质的异体表达成为生产生物医药和特殊化学品的新的高效途径。E. coli是目前基因工程生产重组蛋白的主要载体,但是以大肠杆菌为宿主细胞的表达产物通常聚集成无生物活性的包涵体蛋白质。为获得具有活性的蛋白,首先需用变性剂将包涵体溶解,但同时也破坏了蛋白质的空间结构,因此需要对变性剂溶解的蛋白质进行再折叠才能得到构象正确、有生物学活性的重组蛋白。目前,蛋白质再折叠已成为现代生物工程下游操作中的一个新“单元操作”。但自然界中的蛋白质再折叠问题仍是蛋白质化学基础科学的一个挑战。本文将以溶菌酶为模型蛋白,主要基于溶菌酶再折叠、去折叠的新方法两方面,开展以下研究工作:1、利用盐酸胍变性溶菌酶,用紫外分光光度计及微生物技术监测尿素与盐酸胍对变性溶菌酶复性的协同作用。并利用对盐酸胍与尿素对溶菌酶复性过程的折叠动力学行为,及动力学常数的影响作了相应的讨论。2、利用尿素展开溶菌酶,用荧光相图法监测不同温度下不同尿素浓度对溶菌酶去折叠中间体的影响,并对4℃下溶菌酶的去折叠动力学过程进行讨论。结果表明,温度及尿素浓度对溶菌酶去折叠中间体有很大的影响。溶菌酶去折叠过程符合三态模型,但由于温度与尿素浓度的差异,使溶菌酶去折叠中间体变化过快无法被监测到,而使有些过程看似符合二态模型。3、应用阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠变性溶菌酶和阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵复性溶菌酶。利用串联式压电石英晶体传感器对电导的敏感响应的特性来监测这一系列过程。并对天然态、变性态及复性态三种溶菌酶的荧光发射谱图做了比较与讨论。实验结果表明,串联式石英晶体传感器能够作为一种新型、简单的监测手段来较好的监测表面活性剂对溶菌酶的变性、复性过程。4、以365nm处的紫外光为催化剂、过氧化氢为氧化剂催化氧化苯酚,使用高效液相色谱对苯酚及其中间产物检测并定量。通过改变氧化剂投加量,讨论其对中间产物的影响,并对苯酚的过氧化氢催化氧化动力学过程进行了分析与讨论。实验结果表明,该催化氧化体系能够在较短时间内使高浓度的苯酚得到很好的降解。