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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2, PCV2)是猪断奶后多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)和其他猪圆环病毒相关疾病的原发性病原。免疫预防是控制该类疾病的重要手段之一。本研究成功构建可表达PCV2空衣壳粒子的家蚕表达体系,并利用表达产物制备出PCV2Cap蛋白灭活疫苗,利用小鼠和猪分析了疫苗的免疫原性。采集临床疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征发病仔猪的淋巴结等脏器,采用PCR技术检测PCV2,阳性样本用PK-15细胞进行病毒分离。经间接免疫荧光、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)、免疫电镜观察对分离物进行鉴定。最终分离出5株PCV2,分别命名为PCV2-1、PCV2-2、PCV2-3、PCV2-4和PCV2-5。首先将去核定位信号的Cap基因克隆到大肠杆菌表达载体,分离纯化目的蛋白,经质谱鉴定后用于抗体制备。抗体效价达到1：3200以上者,可用于真核表达Cap蛋白产物的检测。用PCR扩增PCV2Cap基因,或将经人工改造构建Cap突变体基因,克隆到家蚕杆状病毒转移载体,经同源重组获得重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染昆虫细胞和家蚕,收集并纯化表达产物。鉴定结果表明,纯化蛋白主要为病毒空衣壳粒子。经检测,推算PCV2空衣壳在家蚕中的表达量可达1.2-1.6mg/蛹。电镜观察可见到完整的空衣壳粒子。胶体金标记免疫电镜观察可见到完整的胶体金粒子,金粒大小为10nm。将重组病毒培养液按105pfu/头注射五日龄幼蚕,收集发病的幼虫血淋巴或蚕蛹,按1：10(g/v)比例加入PBS液,经破碎、过滤、离心、灭活等程序,制备猪圆环病毒2型cap蛋白家蚕抗原。用206佐剂,按照疫苗乳化程序,将家蚕抗原进行乳化,制备出猪圆环病毒2型cap蛋白亚单位疫苗。用制备的猪圆环病毒2型Cap蛋白亚单位疫苗免疫小鼠,通过检测小鼠PCV2抗体和免疫小鼠攻毒后组织PCV2分离,评价疫苗的免疫原性。同时,设勃林格殷格翰动物保健有限公司生产的猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗对照、空白蚕蛹处理液疫苗(206佐剂)对照、非免疫小鼠对照。试验结果表明,201001批疫苗免疫小鼠均出现了血清学阳转(10/10),PCV2ELISA抗体滴度可达1：800-1：3200,与勃林格殷格翰动物保健有限公司生产的猪圆环病毒2型杆状病毒灭活疫苗对照组相当,而空白蚕蛹处理液疫苗组和非免疫组小鼠抗体均为阴性;3批疫苗免疫小鼠组织的PCV2病毒分离均为阴性(0/10),而非免疫对照组小鼠组织PCV2病毒分离均为阳性(10/10)。用制备的猪圆环病毒2型Cap蛋白亚单位疫苗免疫14-21日龄的PCV2抗体阴性仔猪,通过检测免疫仔猪PCV2抗体和免疫仔猪攻毒后组织PCV2病毒分离,评价疫苗的免疫原性。试验结果表明,免疫仔猪均呈现抗体阳转(5/5),PCV2ELISA抗体滴度可达1：320-1：640,略低于勃林格殷格翰动物保健有限公司生产的猪圆环病毒2型杆状病毒灭活疫苗免疫组,而非免疫组仔猪抗体均为阴性；201001批疫苗仔猪组织PCV2病毒分离均为阴性(0/5),而非免疫对照组仔猪组织PCV2病毒分离均为阳性(5/5)。上述试验结果表明,制备的猪圆环病毒2型cap蛋白亚单位疫苗能刺激小鼠和仔猪产生特异性抗体,且可以有效地抑制PCV2在小鼠和仔猪体内的复制,说明制备的家蚕表达的PCV2Cap蛋白具有良好的免疫原性,具有开发成猪圆环病毒2型疫苗的潜力。