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本文通过改造Anp与Lip1的编码基因以实现它们在毕赤酵母(Pichiapastoris)中的高效表达.首先将Anp的编码基因中114个宿主P.pastoris不偏爱的密码子替换为偏爱密码子.其中主要替换的是编码S、R、T、G、P、L等氨基酸的密码子,也替换了少量编码A、C、V等氨基酸的密码子.然后将人工合成的修改基因插入表达质粒pPICZaA并转化入P.pastoris.通过在自控发酵罐中高密度发酵重组酵母,使重组Anp蛋白的产量达到了290U/mL,约为亲本株产量的500倍左右.同样根据P.pastoris中密码子的使用情况(本文使用TTT编码F,TTG编码L,ATT编码I,ATG编码M,GTT编码V,TCT编码S,TGT编码C,ACT编码T,GCT编码A,GGT编码G,CAT编码H,CAA编码Q,AAC编码N,AAG编码K,GAT编码D,GAA编码E,CCA编码P,TGG编码W,AGA编码R,TAC编码Y),将Lip1成熟多肽序列转换为相应的DNA序列.然后将该人工合成的改造后基因插入表达质粒pGAPZaA并转化入P.pastoris.通过高密度发酵,使重组Lip1蛋白的产量达到了7000U/mL,提高到亲本株产量的70倍左右.本文探索了一种改进植酸酶催化性质的新策略——基于结构的片段改组(Structure-Based Fragment Shuffling,SBFS)来实现上述目的.本文也通过比较各种SBFSp的pH曲线以探索各Anp来源小片段对它们pH曲线的影响.发现除SG外的所有小片段对SBFSp在各个pH上的比活都有影响.本文更进一步发现SD与SE对曲线所施加的影响互相拮抗从而导致了上述的这种矛盾:虽然SD或SE在SBFSp中单独出现,可以促进pH2.5-5.0范围内比活的上升;但这两个小片段在SBFSp中同时出现(如上述的98＃与65＃比)却反而使得该pH范围内的比活降低.SE对pH曲线的影响可以与先前报道的第277位与第282位的定点突变实验结果吻合.而其他各种小片段对pH曲线的影响,先前均未见报道,可为植酸酶的改造提供新线索.结合先前报道,本文提出Afp"铰链"中的V53、A137、I176、A330、A384与K395中的一个或若干个位点可能与Anp和Afp在pH5.0左右的比活差异有关.